細胞傳代步驟:
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
細胞簡介:
人外周血巨噬分離自外周血;外周血是除骨髓之外的血液,臨床上常用一些方法把骨髓中的造血干細胞釋放到血液中,再在從血液中提取分離得到造血干細胞,我們把這樣得到的干細胞稱為外周血干細胞,在二十一世紀初人類開始的生命方舟計劃中提出外周血這一新概念。巨噬細胞屬免疫細胞,有多種功能,是研究細胞吞噬、細胞免疫和分子免疫學的重要對象。巨噬細胞較易獲得,便于培養,并可進行純化。巨噬細胞屬不繁殖細胞群,在條件適宜下可生活2-3周,多用做原代培養,難以長期生存。巨噬細胞(Macrophages)是一種位于組織內的白血球,源自單核細胞,而單核細胞又來源于骨髓中的前體細胞。巨噬細胞和單核細胞皆為吞噬細胞,在脊椎動物體內參與非特異性防衛(先天性免疫)和特異性防衛(細胞免疫)。它們的主要功能是以固定細胞或游離細胞的形式對細胞殘片及病原體進行噬菌作用(即吞噬以及消化),并激活淋巴球或其他免疫細胞,令其對病原體作出反應。
方法簡介:
實驗室分離的人外周血巨噬采用取外周血、通過密度梯度離心法、差速貼壁、細胞因子誘導法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
實驗室分離的人外周血巨噬經CD68免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產品名稱 | 產品規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 | |
組織來源 | 外周血 | 產品貨號 | YS-01X8306 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態 | 巨噬細胞樣 |
培養信息:
培養基:含FBS、M-CSF、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率:每2-3天換液一次
生長特性:貼壁
細胞形態:巨噬細胞樣
傳代特性:屬于終末分化細胞;屬于不增殖細胞群
消化液:(12mM)
培養條件:氣相:空氣,95%;CO2,5%
人外周血巨噬體外培養周期有限;建議使用配套的專用生長培養基及正確的操作方法來培養,以此保證該細胞的佳培養狀態。
細胞復蘇步驟:
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
公司正在出售的產品:
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MonkeyIerleukin6,IL-6ELISAKit 猴白介素6(IL-6)試劑盒 96T/48T 進口分裝
CLIAKitforbFGF-6ELISAKit大鼠堿性成纖維細胞生長因子6
細菌乳糖酵解酚紅瓊脂平板50個
RabbitIerleukin2,IL-2ELISAKit兔子白介素2(IL-2)試劑盒規格:96T/48T
骨形態發生蛋白11單克隆抗體
WIF1重組小鼠 WIF1 / WIF-1 蛋白 Protein
催乳素(PRL)重組蛋白 Recombinant Prolactin (PRL)
BTK重組人 Bruton Tyrosine Kinase / BTK Kinase 蛋白 Protein
IL2 Protein Human 重組人 Interleukin-2 / IL-2 蛋白
NT5E Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 CD73 / NT5E 蛋白
人外周血巨噬細胞ACTH (Adrenorticotrophin hormons 0.5mgACTH (Adrenorticotrophin hormons)(18-39) 促腎上腺皮質激素(18-39)(抗原)
IL2 Protein Human 重組人 Interleukin-2 / IL-2 蛋白
BID重組小鼠 BID 蛋白 (His & GST 標簽) Protein
IL2RG Protein Rat 重組大鼠 IL2RG / CD132 蛋白
CABP5重組人 CABP3 / CABP5 蛋白 Protein
細胞凍存步驟:
待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例;
1.細胞凍存時,棄去培養基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。
3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。