細(xì)胞簡(jiǎn)介：

人胃癌成纖維分離自患有胃癌病人的胃癌組織；胃癌(gastric carcinoma)是起源于胃黏膜上皮的惡性腫瘤，在我國(guó)各種惡性腫瘤中發(fā)病率居，胃癌可發(fā)生于胃的任何部位，其中半數(shù)以上發(fā)生于胃竇部，胃大彎、胃小彎及前后壁均可受累，絕大多數(shù)胃癌屬于腺癌。在胃癌侵襲和轉(zhuǎn)移的過(guò)程中，涉及諸多復(fù)雜的過(guò)程，如細(xì)胞外基質(zhì)的硬化和降解、新生血管的形成等，而這些過(guò)程會(huì)直接或間接的引起腫瘤微環(huán)境(Tumor mircoenvironment)的改變。腫瘤微環(huán)境即腫瘤細(xì)胞生存的外部環(huán)境，由不同種類的非腫瘤性的細(xì)胞與細(xì)胞外基質(zhì)(Extracellular matrix，ECM)構(gòu)成，包括纖維細(xì)胞，免疫細(xì)胞，內(nèi)皮細(xì)胞，間充質(zhì)干細(xì)胞等，腫瘤細(xì)胞通過(guò)調(diào)控這些間質(zhì)細(xì)胞，創(chuàng)造出有利于自身侵襲轉(zhuǎn)移的條件，從而使得腫瘤得到進(jìn)展。越來(lái)越多的證據(jù)表明，腫瘤微環(huán)境的改變?cè)谀[瘤進(jìn)展中扮演著重要的角色。在腫瘤微環(huán)境中，研究多也是主要的間質(zhì)細(xì)胞是腫瘤相關(guān)成纖維細(xì)胞(cancer-associated fibroblasts, CAFs)。CAFs 主要由腫瘤周邊的正常成纖維細(xì)胞和成纖維細(xì)胞樣細(xì)胞演化而來(lái)。胃癌成纖維細(xì)胞多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。剛分離的胃癌成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長(zhǎng)，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長(zhǎng)迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長(zhǎng)，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。

方法簡(jiǎn)介：

實(shí)驗(yàn)室分離的人胃癌成纖維采用混合膠原酶消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。

質(zhì)量檢測(cè)：

實(shí)驗(yàn)室分離的人胃癌成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。

培養(yǎng)信息：

培養(yǎng)基：含FBS、生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等

換液頻率：每2-3天換液一次

生長(zhǎng)特性：貼壁

細(xì)胞形態(tài)：成纖維細(xì)胞樣

傳代特性：可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳

消化液：0.25%

培養(yǎng)條件：氣相：空氣，95%；CO2，5%

人胃癌成纖維體外培養(yǎng)周期有限；建議使用配套的專用生長(zhǎng)培養(yǎng)基及正確的操作方法來(lái)培養(yǎng)，以此保證該細(xì)胞的佳培養(yǎng)狀態(tài)。

細(xì)胞傳代步驟：

如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

細(xì)胞復(fù)蘇步驟:

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。

細(xì)胞凍存步驟:

待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí)，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例； 
1．細(xì)胞凍存時(shí)，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。 
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。本公司按每個(gè)凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個(gè)細(xì)胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個(gè)小時(shí)以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲(chǔ)存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
公司正在出售的產(chǎn)品：

小鼠β內(nèi)啡肽受體(β-EPR)ELISA 試劑盒

Human vitamin B6 (VB6) ELISA Kit 人B6(VB6)試劑盒

HumanCollagenaseTypeIIELISAKit 人膠原酶II(CollagenaseII)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

Humanc-fos試劑盒人c-fos試劑盒規(guī)格：96T/48T

轉(zhuǎn)基因玉米MON863品系基因定量試劑盒20次

Humanserine/threonineproteinkinase,STKELISAKit人絲/蘇蛋酸酶(STK)試劑盒規(guī)格：96T/48T

人組胺(HIS)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人抵抗素(Resistin)ELISAKIT   ELISA.   96T/48T

人骨特異性堿性0酸酶B(ALP-B)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

人骨鈣素/骨谷酸蛋白(OT/BGP)ELISAKit   ELISA.   96T/48T

DNA甲基轉(zhuǎn)移酶-3α抗體

豚鼠環(huán)0酸鳥苷(cGMP)試劑盒 ，英文名： cGMP ELISA Kit

Human hepatitis D virus IgG (HDV IgG) ELISA Kit 人丁型肝IgG(HDV IgG)試劑盒

MonkeyapoproteinB100,apo-B100ELISAKit 猴載脂蛋白B100(apo-B100)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝

CLIAKitforbFGF-4ELISAKit大鼠堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子4

細(xì)菌色酶比色法定量試劑盒20次

RabbitIerleukin17,IL-17ELISAKit兔白介素17(IL-17)試劑盒規(guī)格：96T/48T

宮頸癌抑癌蛋白5/鋅指蛋白434抗體

B18R重組牛痘病毒 B18R / B19R 蛋白 Protein

TIMP-2(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-2 0.5mgTIMP-2(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-2) 金屬蛋白酶組織抑制因子-2(抗原)

TIGIT重組人 TIGIT / VSTM3 蛋白 Protein

IL20RA Protein Human 重組人 IL20RA / IL-20RA 蛋白 (ECD, Fc 標(biāo)簽)

MAPK14 Protein Human 重組人 p38 alpha / MAPK14 蛋白

人胃癌成纖維細(xì)胞TIMP-2(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-2 0.5mgTIMP-2(Tissue Inhibitor of Metalloproteinase-2) 金屬蛋白酶組織抑制因子-2(抗原)

IL20RA Protein Human 重組人 IL20RA / IL-20RA 蛋白 (ECD, Fc 標(biāo)簽)

B18R重組牛痘病毒 B18R / B19R 蛋白 Protein

MAPK14 Protein Human 重組人 p38 alpha / MAPK14 蛋白

TIGIT重組人 TIGIT / VSTM3 蛋白 Protein