細胞傳代步驟:
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
細胞簡介:
人腎動脈平滑肌分離自腎動脈組織;腎動脈的分支為葉間動脈,穿行于腎柱內,上行至皮質與髓質交界處,形成與腎表面平行的弓狀動脈。小葉間動脈向被膜發出毛細血管,并向周圍的腎小體發出入球小動脈,進入腎小囊后形成球形的毛細血管網,再匯集成出球小動脈,出腎小體。直小動脈分支形成毛細血管網,再匯合成直小靜脈,入弓狀靜脈、葉間靜脈,后匯合成腎靜脈經腎門出腎,注入下腔靜脈。腎動脈既是腎的營養血管,又是腎的機能血管,與腎泌尿機能密切相關。腎動脈在腎實質內形成兩個毛細血管網:腎小球毛細血管網,血壓較高,利于血漿濾過形成原尿;球后毛細血管網,血壓較低,利于腎小管的重吸收。腎動脈平滑肌細胞是腎動脈的重要結構細胞之一,在機體的正常生理過程中發揮著重要作用。腎動脈平滑肌細胞原代分離培養3天后,可見細胞貼壁伸展,細胞形態大小不一,呈梭形、不規則形、三角形或扇形,核卵圓形、居中;2周后細胞匯合,多數細胞伸展呈長梭形,胞漿豐富,有分枝狀突起,細胞平行排列成單層或部分區域多層重疊生長,高低起伏;細胞密度低時,常交織成網狀;密度高時,則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細胞生長較快,4-6天即可匯合,并保持上述形態學特征和生長特點。
方法簡介:
公司實驗室分離的人腎動脈平滑肌采用-膠原酶聯合消化法結合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
公司實驗室分離的人腎動脈平滑肌經α-SMA免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產品名稱 | 產品規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 | |
組織來源 | 腎動脈組織 | 產品貨號 | YS-01X7262 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態 | 成纖維細胞樣 |
培養信息:
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳5代左右;3代以內狀態佳
消化液 0.25%
培養條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞復蘇步驟:
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
公司正在出售的產品:
小鼠降鈣素原(PCT)ELISA 試劑盒
People mumps virus IgG ELISA Kit 人腮腺病毒IgG 試劑盒
HumanmembraneIgD,mIgDELISAKit 人表面膜免疫球蛋白D(mIgD)試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humanai-cytomegalovirusIgMaibody,ai-CMVIgM試劑盒人抗巨細胞病毒抗體IgM(ai-CMVIgM)試劑盒規格:96T/48T
植物基因組DNA化試劑盒(高多糖/酚)50次
Humanα1-Acidglycoprotein,α1-AGPELISAKit人內皮型合成酶3(eNOS-3)試劑盒規格:96T/48T
小鼠小鼠透明質酸 英文名稱: Mouse Hyaluronic Acid 英文縮寫: HA
小鼠低氧誘導因子1a 英文名稱: Hypoxia Inducible Factor 1a 英文縮寫: HIF-1α
小鼠熱休克蛋白60 英文名稱: Heat shock protein 60 英文縮寫: Hsp-60
小鼠組胺 英文名稱: Histamine 英文縮寫: HIS
APC標記人CD71單克隆抗體
小鼠細胞間粘附分子1(ICAM-1/CD54)ELISA 試劑盒 96T/48T
Human phosphotylinosital 3 kinase (PI3K) ELISA Kit 人0酸肌醇3激酶(PI3K)試劑盒
HumanPancreaticAmylase,PAMYELISAKit 人胰(PAMY)試劑盒 96T/48T 進口分裝
ChickenIerferonβ,IFN-β/IFNB試劑盒雞β干擾素(IFN-β/IFNB)試劑盒規格:96T/48T
載玻片細胞EGFR蛋白表達熒光顯微鏡試劑盒10/20次
Mousegonadoopin-releasinghormone,GHELISAKit小鼠釋放激素(GH)試劑盒規格:96T/48T
分揀微管連接蛋白抗體
ACVR2A重組人 ACVR2 / ACTRII / ACVR2A 蛋白 (Fc 標簽) Protein
接觸蛋白2(CNTN2)重組蛋白 Recombinant Contactin 2 (CNTN2)
BOLA1重組人 BOLA1 蛋白 Protein
CDH5 Protein Human 重組人 VE-Cadherin / CD144 / CDH5 蛋白 (His & Fc 標簽)
HA Protein H3N8 重組甲型流感 H3N8 (A/equine/Gansu/7/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白
人腎動脈平滑肌細胞接觸蛋白2(CNTN2)重組蛋白 Recombinant Contactin 2 (CNTN2)
CDH5 Protein Human 重組人 VE-Cadherin / CD144 / CDH5 蛋白 (His & Fc 標簽)
ACVR2A重組人 ACVR2 / ACTRII / ACVR2A 蛋白 (Fc 標簽) Protein
HA Protein H3N8 重組甲型流感 H3N8 (A/equine/Gansu/7/2008) 血凝素HA1 (Hemagglutinin) 蛋白
BOLA1重組人 BOLA1 蛋白 Protein
細胞凍存步驟:
待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例;
1.細胞凍存時,棄去培養基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。
3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。