產(chǎn)品內(nèi)容:
酸性提取液:25mL×1 瓶,4℃保存;
堿性提取液:25mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 1.5mL×1 支,4℃保存
試劑三:粉劑×1 支,-20℃保存,用時加入 1.6mL 雙蒸水,混勻,4℃保存一周;
試劑四:粉劑×1 支,4 ℃保存,用時加入 1.9mL 雙蒸水,混勻,4℃保存一周;
試劑五:液體 0.7mL×1 支,4 ℃保存;
試劑六:液體 10mL×1 瓶,4 ℃保存;
試劑七:自備。19.2mL 乙醇和 0.8mL 蒸餾水充分混合備用。
NAD 標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1 支,-20℃保存。臨用前加入 1.5mL 蒸餾水,即 2umol/mL,將其稀釋為 1.25nmol/mL 的 NAD 標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
NADH 標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1 支,-20℃保存。臨用前加入 1.4mL 蒸餾水,即 2umol/mL,將其稀釋為 1.25nmol/mL 的 NADH 標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
產(chǎn)品屬性:
產(chǎn)品名稱 | 檢測方法 | 規(guī)格 | 貨號 |
PK丙酮酸激酶檢測試劑盒微量法 | 微量法 | 100管/96樣 | FS-01S63489 |
商品介紹:
測定意義
PK(EC 2.7.1.40)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細(xì)胞中,催化糖酵解過程中的最后一步反應(yīng),是糖酵解過程中的主要限速酶之一,也是產(chǎn)生ATP的關(guān)鍵酶之一,因此測定PK活性具有重要意義。
測定原理
PK催化磷酸烯醇式丙酮酸和ADP生成ATP和丙酮酸,乳酸脫氫酶進一步催化NADH和丙酮酸生成乳酸和NAD+,在340nm下測定NADH下降速率,即可反映PK活性。
需自備的儀器和用品
紫外分光光度計/酶標(biāo)儀、臺式離心機、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96孔板、研缽、冰和蒸餾水
注意事項:
1、公司產(chǎn)品僅用于科研操作過程應(yīng)避光。不可將試劑一、二、三和四混合后再加,必須分開加。
2、反應(yīng)過程要注意避光。
3、當(dāng)吸光值大于 1 時,建議稀釋后測量,計算公式中應(yīng)當(dāng)乘以稀釋倍數(shù)。
操作步驟:
一、NAD+和 NADH 的提取:
1、血清(漿)中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:取 0.1mL 血清(漿),加入 0.5mL 酸性提取液,煮沸 5min (蓋緊,以防止水分 散失),冰浴冷卻后,10000g 4℃離心 10min;取上清 200uL,加入等體積堿性提取液;混勻,10000g 4℃離心 10min,取上清,冰上保存待測。
NADH 的提取:取 0.1mL 血清(漿),加入 0.5mL 堿性提取液,煮沸 5min(蓋緊,以防止水分 散失),冰浴冷卻后,10000g 4℃離心 10min,取上清 200uL,加入等體積酸性提取液;混勻,10000g 4℃離心 10min,取上清,冰上保存待測。
2、組織中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:稱取約 0.1g 組織,加入 0.5mL 酸性提取液,冰浴研磨,煮沸 5min(蓋緊,以防 止水分散失),冰浴冷卻后,10000g 4℃離心 10min,取上清 200uL,加入等體積堿性提取液混勻, 10000g 4℃離心 10min,取上清,冰上保存待測。
NADH 的提取:稱取約 0.1g 組織,加入 0.5mL 堿性提取液,冰浴研磨,煮沸 5min(蓋緊,以防 止水分散失),冰浴冷卻后,10000g 4℃離心 10min,取上清 200uL,加入等體積酸性提取液混勻, 10000g 4℃離心 10min,取上清,冰上保存待測。
3、細(xì)胞或細(xì)菌中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:收集 500 萬細(xì)胞或細(xì)菌,加入 0.5mL 酸性提取液,超聲波破碎 1min(強度 20% 或 200W,超聲 2s,停 1s),煮沸 5min(蓋緊,以防止水分散失),冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min,取上清液 200uL 另一新的離心管中,加入等體積的堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4℃ 離心 10min,取上清,冰上保存待測。
NADH 的提取:收集 500 萬細(xì)胞或細(xì)菌,加入 0.5mL 堿性提取液,超聲波破碎 1min(強度 20% 或 200W,超聲 2s,停 1s),煮沸 5min(蓋緊,以防止水分散失),冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min,取上清液 200uL 另一新的離心管中,加入等體積的酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4℃ 離心 10min,取上清,冰上保存待測。
下列是公司正在熱銷的產(chǎn)品:
小鼠鈣結(jié)合蛋白S100A11(S100A11) 試劑盒Human SMOX(Spermine oxidase) ELISA Kit4號染色體開放閱讀框51抗體
小鼠鈣結(jié)合蛋白S100A7(S100A7) 試劑盒Human AMOT(Angiomotin) ELISA Kit分支GBE1抗體
小鼠S100鈣結(jié)合蛋白B (S100B) 試劑盒Human CASP7(Caspase-7) ELISA Kit磷化絲切蛋白抗體
小鼠鈣結(jié)合蛋白S100A6(S100A6) 試劑盒Human NEFH(Neurofilament heavy polypeptide) ELISA Kit補體成分5受體1抗體
小鼠S100鈣結(jié)合蛋白A12(S100A12 )試劑盒Human HSD11B1(Corticosteroid 11-beta-dehydrogenase isozyme 1) ELISA Kit分裂周期2樣蛋白激6抗體
小鼠山梨脫氫(SDH)試劑盒Human SEMA3A(Semaphorin-3A) ELISA Kit補體C3IP1抗體
小鼠分泌型磷脂A2(sPLA2)試劑盒Human HRG(Histidine-rich glycoprotein) ELISA Kit磷化周期檢測點激2抗體
小鼠促胰液(SCT)試劑盒Human SMOX(Spermine oxidase) ELISA Kit周期依賴性激11抗體
小鼠分泌型球蛋白A(sIgA)試劑盒Human SSTR2(Somatostatin receptor type 2) ELISA Kit周期依賴性激10
小鼠硒蛋白P(SEPP1)試劑盒Human CASP7(Caspase-7) ELISA Kit8號染色體開放閱讀框86抗體
小鼠腦信號7A(SEMA7A)試劑盒Human NEFH(Neurofilament heavy polypeptide) ELISA Kit磷化分裂周期蛋白25B抗體
小鼠絲/蘇蛋白磷(STK)試劑盒 Human AMOT(Angiomotin) ELISA Kit磷化分裂周期蛋白25B抗體
小鼠血清淀粉樣蛋白A(SAA)試劑盒Human APLN(Apelin) ELISA Kit磷化半胱蛋白蛋白6抗體
小鼠Sestrin 1蛋白 (SESN1) 試劑盒Human GAS1(Growth arrest-specific protein 1) ELISA Kit9號染色體開放閱讀框172抗體
小鼠Sestrin 2蛋白 (SESN2) 試劑盒Human MASP2(Mannan-binding lectin serine protease 2) ELISA Kit磷化P27抗體/周期依賴激抑制劑
PK丙酮酸激酶檢測試劑盒微量法乙對酯 99%氫氧化 AR,90%Anti-Phospho-Beta-Catenin (Ser552) 磷化β 連環(huán)蛋白抗體
1-亞硝基吡咯烷 99%氫氧化 granules,AR,90%Anti-Phospho-Beta-Catenin (Ser675) 磷化β 連環(huán)蛋白抗體
4-肼基-7-硝基-2,1,3-并氧雜惡二唑 98%氫氧化鈉 GR,97%,片狀A(yù)nti-Phospho-Beta-Catenin (Thr41/Ser45) 磷化β 連環(huán)蛋白抗體
對壬基 分析標(biāo)準(zhǔn)品,異構(gòu)體混合物氫氧化鈉 顆粒狀,AR,96%Anti-Cateninma gamma gamma連環(huán)蛋白抗體
β-萘標(biāo)準(zhǔn)溶液 分析標(biāo)準(zhǔn)品,10 ng/μl活性炭口罩 三層無紡布,一層活性碳anti-Cathepsin B 組織蛋白B抗體
β-萘 分析標(biāo)準(zhǔn)品乙酰酮 GCS,≥99.6% (GC)Anti-DPP-I 組織蛋白C抗體
1-萘磷 99%乙酰酮 AR,99%anti-Cathepsin E 組織蛋白E抗體
煙 異構(gòu)體總量:99%(劇品)乙酰酮 CP,98%Anti-Cathepsin D 組織蛋白D抗體