產品屬性:
產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
FBA果糖1,6二磷酸醛縮酶紫外分光光度法 | 紫外分光光度法 | 50管/48樣 | FS-01S63504 |
商品介紹:
測定意義
植物葉綠體中果糖1,6-二磷酸醛縮酶是光合作用中參與calvin循環的重要酶。催化果糖1,6-二磷酸和景天庚酮糖1,7-二磷酸的合成反應,在各種逆境脅迫下表現不同的響應。
測定原理
果糖1,6-二磷酸醛縮酶催化果糖1,6-二磷酸生成3-磷酸甘油醛和磷酸二羥丙酮,在磷酸丙糖異構酶和α-磷酸甘油脫氫酶作用下催化NADH和磷酸二羥丙酮生成NAD和α-磷酸甘油,340nm處吸光值的變化可反映果糖1,6-二磷酸醛縮酶活性的高低。
自備實驗用品及儀器
天平、震蕩儀、低溫離心機、研缽、紫外分光光度計/酶標儀、1mL石英比色皿(UV板)。
產品內容:
公司產品僅用于科研酸性提取液:25mL×1 瓶,4℃保存;
堿性提取液:25mL×1 瓶,4℃保存;
試劑一:液體 5mL×1 瓶,4℃保存;
試劑二:液體 1.5mL×1 支,4℃保存
試劑三:粉劑×1 支,-20℃保存,用時加入 1.6mL 雙蒸水,混勻,4℃保存一周;
試劑四:粉劑×1 支,4 ℃保存,用時加入 1.9mL 雙蒸水,混勻,4℃保存一周;
試劑五:液體 0.7mL×1 支,4 ℃保存;
試劑六:液體 10mL×1 瓶,4 ℃保存;
試劑七:自備。19.2mL 乙醇和 0.8mL 蒸餾水充分混合備用。
NAD 標準品:粉劑×1 支,-20℃保存。臨用前加入 1.5mL 蒸餾水,即 2umol/mL,將其稀釋為 1.25nmol/mL 的 NAD 標準溶液備用。
NADH 標準品:粉劑×1 支,-20℃保存。臨用前加入 1.4mL 蒸餾水,即 2umol/mL,將其稀釋為 1.25nmol/mL 的 NADH 標準溶液備用。
操作步驟:
一、NAD+和 NADH 的提取:
1、血清(漿)中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:取 0.1mL 血清(漿),加入 0.5mL 酸性提取液,煮沸 5min (蓋緊,以防止水分 散失),冰浴冷卻后,10000g 4℃離心 10min;取上清 200uL,加入等體積堿性提取液;混勻,10000g 4℃離心 10min,取上清,冰上保存待測。
NADH 的提取:取 0.1mL 血清(漿),加入 0.5mL 堿性提取液,煮沸 5min(蓋緊,以防止水分 散失),冰浴冷卻后,10000g 4℃離心 10min,取上清 200uL,加入等體積酸性提取液;混勻,10000g 4℃離心 10min,取上清,冰上保存待測。
2、組織中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:稱取約 0.1g 組織,加入 0.5mL 酸性提取液,冰浴研磨,煮沸 5min(蓋緊,以防 止水分散失),冰浴冷卻后,10000g 4℃離心 10min,取上清 200uL,加入等體積堿性提取液混勻, 10000g 4℃離心 10min,取上清,冰上保存待測。
NADH 的提取:稱取約 0.1g 組織,加入 0.5mL 堿性提取液,冰浴研磨,煮沸 5min(蓋緊,以防 止水分散失),冰浴冷卻后,10000g 4℃離心 10min,取上清 200uL,加入等體積酸性提取液混勻, 10000g 4℃離心 10min,取上清,冰上保存待測。
3、細胞或細菌中 NAD+和 NADH 的提取:
NAD+的提取:收集 500 萬細胞或細菌,加入 0.5mL 酸性提取液,超聲波破碎 1min(強度 20% 或 200W,超聲 2s,停 1s),煮沸 5min(蓋緊,以防止水分散失),冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min,取上清液 200uL 另一新的離心管中,加入等體積的堿性提取液使之中和,混勻,10000g 4℃ 離心 10min,取上清,冰上保存待測。
NADH 的提取:收集 500 萬細胞或細菌,加入 0.5mL 堿性提取液,超聲波破碎 1min(強度 20% 或 200W,超聲 2s,停 1s),煮沸 5min(蓋緊,以防止水分散失),冰浴中冷卻后,10000g 4 ℃離心 10min,取上清液 200uL 另一新的離心管中,加入等體積的酸性提取液使之中和,混勻,10000g 4℃ 離心 10min,取上清,冰上保存待測。
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hbs1樣蛋白抗體Human HAAO(3-hydroxyanthranilate 3,4-dioxygenase) ELISA Kit丁二二乙酯
縮復合物亞型蛋白3抗體Human SH2D4A ELISA Kit氧化鋁G
RNA結合蛋白39抗體Human SH3BGR ELISA Kit肉豆蔻
注意事項:
1、操作過程應避光。不可將試劑一、二、三和四混合后再加,必須分開加。
2、反應過程要注意避光。
3、當吸光值大于 1 時,建議稀釋后測量,計算公式中應當乘以稀釋倍數。