【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。

1.產品名稱：兔椎間盤纖維環細胞操作步驟

2.組織來源：椎間盤組織

3.產品規格：5×10^5cells/T25細胞培養瓶

4.細胞簡介：

兔椎間盤纖維環細胞分離自椎間盤組織；椎間盤是位于脊柱兩椎體之間，由軟骨板、纖維環、髓核組成的一個密封體。上下有軟骨板，是透明軟骨復蓋于椎體上，下面骺環中間的骨面。上下的軟骨板與纖維環一起將髓核密封起來。纖維環由膠原纖維束的纖維軟骨構成，位于髓核的四周。纖維環的纖維束相互斜行交叉重疊，使纖維環成為堅實的組織，能承受較大的彎曲和扭轉負荷。纖維環的前側及兩側較厚，而后側較薄。纖維環的前部有強大的前縱韌帶，后側的后縱韌帶較窄、較薄。纖維環細胞密度為9000個細胞/mm3，其外層的細胞呈梭型，主要屬于纖維細胞，內層細胞呈圓形，主要屬于軟骨細胞。在培養的情況下，用透射電鏡觀察則有許多共同的超微結構表現，它們的核較圓，核仁較明顯。細胞質內可見大量的附有核糖體顆粒的粗面內質網和滑面內質網。細胞質內線粒體多，為橢圓形，有的可看到雙層單位膜，由單位膜包繞初級深酶體和次級深酶體。細胞質內有一系列的扁平囊及小泡主成的高爾基復合體和分泌顆粒，纖維環細胞合成分泌蛋白多糖及膠原纖維的能力很旺盛，保證纖維環生理代謝活動所需的構造物質的供給。一但這種供給減少，纖維環的生物性能就會減弱，椎間盤開始退變。

本公司的兔椎間盤纖維環細胞采用膠原酶-*聯合消化法并結合軟骨細胞培養基培養篩選制備而來，細胞總量約為5×10^5cells/瓶；細胞經Ⅰ型膠原蛋白、Ⅱ型膠原蛋白免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

5.培養基信息：

DMEM-F12、FBS、軟骨細胞生長添加劑、Insulin、Transferrin、Selenium Solution、Penicillin、Streptomycin等

冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步驟：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優質胎牛血清，10%。
2、培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
優勢：
1、細胞株種類齊全，包括腫瘤細胞、正常細胞、耐藥細胞株，如：人滑膜細胞，人胃癌細胞，人細胞，人腎近曲小管上皮細胞，肝癌細胞，心肌細胞，子宮內膜細胞等
2、*，專業的細胞培養技術指導
3、購買本公司的細胞株，免費復蘇
4、客戶收到細胞后一天回傳細胞圖片，三天回傳細胞生長狀態圖片，五天內有問題公司負責重發，超過五天時限至一個月內重發細胞收半價，超過一個月重發全額收費。
5、經濟、實惠、可靠，完善、穩定的實驗體系，優秀的科研隊伍，*的實驗設備、準確可靠的實驗結果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細胞株、抗體、血清、培養基、常用生化試劑、耗材。
metalloproteinase-3/Transin-1/SL-1/Stromelysin-1 precursor)
羅丹明標記的羊抗小鼠IgG MMP-7(Matrilysin/matrix metalloproteinases-7)
羅丹明標記的羊抗兔IgG MMP-14(Matrix metalloproteinase-14)
FITC標記的驢抗羊IgG GFRAlpha-1(GDNF family receptor alpha-1)
FITC標記的小鼠抗羊IgG Ang- II (Angiotensin II )
辣根過氧化物酶標記的羊抗小鼠IgG GLUT2(Glucose transporter type 2)
辣根過氧化物酶標記的兔抗羊IgG ANP(atrial natriuretic peptide)
Alexa Fluor 555標記的兔抗羊IgM GFRA4 ( Persephin receptor ) (GFR receptor alpha 4)
PE-Cy5.5標記的兔抗羊IgM GHRF (GHRH)
PE-Cy7標記的兔抗羊IgM ANGPTL1/ANG-1 (Angiopoietin-like Protein 1)
PE-Cy7標記的驢抗豚鼠IgG GLUT4(Glucose transporter type 4)
PE-Cy5.5標記的兔抗豚鼠IgM GIP (Gastric Inhibitory polypeptide)
PE-Cy7標記的兔抗豚鼠IgM ANGPTL2/ANG-2 (Angiopoietin-like Protein 2)
PE-Cy3標記的兔抗羊IgM GLP-2(Glucagon-like peptide-2)
PE-CY5標記的兔抗羊IgM GRP94 (gp96)
辣根過氧化物酶標記的驢抗羊IgG Annexin A
辣根過氧化物酶標記的小鼠抗羊IgG G Protein(Guanine nucleotide-binding regulatory protein)
羅丹明標記的羊抗大鼠IgG GR (Glucocorticoid receptor)
Cy7標記的驢抗豚鼠IgG Annexin II
PE標記的驢抗豚鼠IgG CKR-L2( G protein-coupled receptor-2 )
PE-Cy3標記的驢抗豚鼠IgG GTP-CH-1
Cy5標記的驢抗豚鼠IgG H5N1-M2(Avian influenza Matrix Protein-2)
antibody) ELISA Kit  人單純皰疹病毒Ⅱ型抗體   48T
Human Estrogen-induced protein pS2 ELISA Kit  人雌激素誘導蛋白PS2   48T
BV(Human bacterial vaginosis) ELISA Kit  人細菌病   48T
HSV I Ab(Human Herpes simplexvirus I antibody) ELISA Kit  人單純皰疹病毒Ⅰ型抗體   48T
Human Estrogen-induced protein pS2 ELISA Kit  人雌激素誘導蛋白PS2   48T
HPV-IgM(Human papillomavirus IgM) ELISA Kit  人狀瘤病毒抗體IgM   48T
HPV-IgG(Human papillomavirus IgG) ELISA Kit  人狀瘤病毒抗體IgG   48T
HSV-Ag2(Human Herpes simplex virus 2) ELISA Kit  人單純皰疹病毒抗原2   48T
fPSA(Human Free Prostate Specific Antigen) ELISA Kit  人游離前列腺特異性抗原   48T
PSA(Human prostate specific antigen) ELISA Kit  人前列腺特異性抗原   48T
PS(Human phosphatidylserine) ELISA Kit  人磷脂酰*   48T
PC/CPG(Human choline phosphoglyceride) ELISA Kit  人*磷酸甘油酯   48T
TBA(Human Total bile acide) ELISA Kit  人總膽汁酸   48T
Apo C3(Human Apolipoprotein C3) ELISA Kit  人載脂蛋白C3   48T
CH(Human cholesterol) ELISA Kit  人血清總*   48T
MT2(Human Metallothionein 2) ELISA Kit  人金屬硫蛋白2   48T
sLOX-1(Human Soluble Lectin-like oxidized low density lipoprotein receptor-1) ELISA Kit  人可溶性凝集素樣氧化低密度脂蛋白受體1   48T
3-NT(Human 3-Nitrotyrosine) ELISA Kit  人3-硝基*   48T
GAG(Human glycosaminoglycan) ELISA Kit  人糖胺聚糖   48T
CysLTs(Human cysteinyl leukotrienes) ELISA Kit  人半胱氨酰白三烯   48T
CALU(Human calumenin) ELISA Kit  人鈣腔蛋白   48T