1.產品名稱：兔血管外膜成纖維細胞實驗方法

2.組織來源：血管組織

3.產品規格：5×10^5cells/T25細胞培養瓶

4.細胞簡介：

兔血管外膜成纖維細胞分離自血管外膜組織；血管外膜是由疏松結締組織組成，其中含螺旋狀或縱向分布的彈性纖維和膠原纖維。血管壁的結締組織細胞以成纖維細胞為主，當血管受損傷時，成纖維細胞具有修復外膜的能力。有的動脈中膜和外膜的交界處，有密集的彈性纖維組成的外彈性膜。成纖維細胞（Fibroblast）是疏松結締組織的主要細胞成分，由胚胎時期的間充質細胞分化而來。成纖維細胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構，其細胞核呈規則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛，細胞質嗜弱堿性，具明顯的蛋白質合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實現跟纖維細胞的互相轉化；成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的血管外膜成纖維細胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養基中。30min細胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現為小的突起；6h后細胞基本貼壁*，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團；細胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態，細胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細胞質透明，細胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細胞融合，并彼此連接成網狀；細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。血管外膜成纖維細胞是血管外膜的主要組成細胞之一，其主要生理功能合成和釋放細胞外基質以及組織損傷后及時大量聚集修復損傷組織。

本公司的兔血管外膜成纖維細胞采用*-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來，細胞總量約為5×10^5cells/瓶；細胞經Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。

5.培養基信息：

DMEM[H]、FBS、成纖維細胞生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等

優勢：
1、細胞株種類齊全，包括腫瘤細胞、正常細胞、耐藥細胞株，如：人滑膜細胞，人胃癌細胞，人細胞，人腎近曲小管上皮細胞，肝癌細胞，心肌細胞，子宮內膜細胞等
2、*，專業的細胞培養技術指導
3、購買本公司的細胞株，免費復蘇
4、客戶收到細胞后一天回傳細胞圖片，三天回傳細胞生長狀態圖片，五天內有問題公司負責重發，超過五天時限至一個月內重發細胞收半價，超過一個月重發全額收費。
5、經濟、實惠、可靠，完善、穩定的實驗體系，優秀的科研隊伍，*的實驗設備、準確可靠的實驗結果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細胞株、抗體、血清、培養基、常用生化試劑、耗材。
操作步驟：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優質胎牛血清，10%。
2、培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
Alexa Fluor 555標記的兔抗馬IgM PI3K
羅丹明標記的兔抗馬IgM BMP4(bone morphogenetic protein 4)
Cy3標記的兔抗馬IgM PLGF (Placenta growth factor)
Cy5.5標記的兔抗馬IgM PLGF (Placenta growth factor)
Cy5標記的兔抗馬IgM PLGF (Placenta growth factor fragment)(human)
Cy7標記的兔抗馬IgM PP-1
PE標記的兔抗馬IgM BMPR-1A(Bone Morphogenetic protein Receptor-1A)
FITC標記的兔抗馬IgM PPAR-delta (peroxisome proliferator-activated receptor)
*標記的兔抗馬IgM PP-2A (protein phosphatase 2A)
Cy5標記的羊抗牛IgG BOb-1(B-cell oct-binding protein 1)
*標記的羊抗牛IgG PP-2B alpha 1
FITC標記的羊抗牛IgG PR (Progestogerone receptor)
羅丹明標記的羊抗牛IgG PS-1(NT)，Presennillin-1(S182)
PE-Cy3標記的羊抗牛IgG PS-1，Presennillin-1(CT)
PE-CY5標記的羊抗牛IgG BRCA1(Breast cancer susceptbility gene 1)(mouse rat)
APC標記的羊抗牛IgG BRCA1
Alexa Fluor 350標記的羊抗牛IgG PSD-95
Alexa Fluor 488標記的羊抗牛IgG BRCA2(Breast cancer susceptbility gene 2)
Alexa Fluor 555標記的羊抗牛IgG PTP-1B (Protein-tyrosine phosphatase, non-receptor )
Alexa Fluor 647標記的羊抗牛IgG RAR-Alpha (Retinoic acid -R-Alpha)
PE-Cy5.5標記的羊抗牛IgG glycoprotein (E1 glycoprotein) [Rubella virus]
PE-Cy7標記的羊抗牛IgG SAP-1 (Synapse associated protein-I) peptide
Cy7標記的羊抗牛IgG SARS S-protein(抗原)
堿性磷酸酶（AP）標記的羊抗牛IgG SARS putative orflab polyprotein (SARS coronavirus CUHK-W1)(抗原)
膠體金標記的羊抗牛IgG BSEP peptide
 48T
ALP-B(Human Bone-specific Alkphase B) ELISA Kit  人骨特異性堿性磷酸酶B   48T
OT/BGP(Human Osteocalcin/Bone gla protein) ELISA kit  人骨鈣素/骨*蛋白   48T
sRANKL(Human soluble receptor activator of nuclear factor-kB ligand) ELISA Kit  人可溶性核因子κB受體活化因子配基   48T
1,25-(OH)2D3/DVD/DHVD 3(Human 1,25-dihydroxyvitamin D3) ELISA Kit  人1,25二羥基*3   48T
Human histon-H2b ELISA Kit  人組蛋白H2b   48T
OPG(Human Osteoprotegerin) ELISA KIT  人骨保護素   48T
BMPR- II (Human Bone morphogenetic protein receptor II ) ELISA Kit  人骨成型蛋白受體Ⅱ   48T
BMPR-1A(Human Bone morphogenetic protein receptor 1A) ELISA Kit  人骨成型蛋白受體1A   48T
BMP-4(Human Bone morphogenetic protein 4) ELISA Ki  人骨成型蛋白4   48T
BMP-2(Human Bone morphogenetic protein 2) ELISA Kit  人骨成型蛋白2   48T
cAMP(Human cyclic adenosine monophosphate) ELISA Kit  人*   48T
MASP(Human mannan binding lectin associated serine protease) ELISA Kit  人甘露聚糖結合凝集素相關*蛋白酶   48T
CDK-7(Human Cyclin-dependent kinase 7) ELISA Kit  人周期素依賴性激酶7   48T
CDK-2(Human Cyclin-dependent kinase 2) ELISA Kit  人周期素依賴性激酶2   48T
CDK-1(Human Cyclin-dependent kinase 1) ELISA Kit  人周期素依賴性激酶1   48T
AMPK(Human Phosphorylated adenosine monophosphate activated protein kinase) ELISA kit  人磷酸化腺苷酸活化蛋白激酶   48T
LDH(Human Lactate Dehydrogenase) ELISA Kit  人