1.產(chǎn)品名稱：兔膀胱平滑肌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方法
2.組織來(lái)源：膀胱組織
3.產(chǎn)品規(guī)格：5×10^5cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶
4.細(xì)胞簡(jiǎn)介：
兔膀胱平滑肌細(xì)胞分離自膀胱組織；膀胱是主要由平滑肌細(xì)胞組成的中空器官，膀胱平滑肌的舒張和收縮使得膀胱分別儲(chǔ)存和排出尿液。膀胱平滑肌細(xì)胞表型的調(diào)控和可誘導(dǎo)一氧化氮合酶的表達(dá)與多種病理狀況有關(guān)，包括膀胱功能障礙。研究表明，組織缺氧抑制膀胱平滑肌細(xì)胞的增殖，膀胱平滑肌細(xì)胞的分化依賴于膀胱上皮細(xì)胞釋放的因子。膀胱平滑肌細(xì)胞外基質(zhì)的分泌表型可通過(guò)細(xì)胞所經(jīng)歷的機(jī)械變形頻率而改變。平滑肌是許多疾病中的共同路徑，因此，了解在疾病發(fā)生及持續(xù)過(guò)程中平滑肌怎樣變化，這是治療方法取得進(jìn)展的重要一步。膀胱壁由三層組織組成，由內(nèi)而外為黏膜層、肌層和外膜。其中，肌層主要由平滑肌構(gòu)成。膀胱平滑肌細(xì)胞原代分離培養(yǎng)3天后，可見(jiàn)細(xì)胞貼壁伸展，細(xì)胞形態(tài)大小不一，呈梭形、不規(guī)則形、三角形或扇形，核卵圓形、居中；2周后細(xì)胞匯合，多數(shù)細(xì)胞伸展呈長(zhǎng)梭形，胞漿豐富，有分枝狀突起，細(xì)胞平行排列成單層或部分區(qū)域多層重疊生長(zhǎng)，高低起伏；細(xì)胞密度低時(shí)，常交織成網(wǎng)狀；密度高時(shí)，則排列為旋渦狀或柵欄狀。傳代后細(xì)胞生長(zhǎng)較快，4-6天即可匯合，并保持上述形態(tài)學(xué)特征和生長(zhǎng)特點(diǎn)。體外培養(yǎng)膀胱平滑肌細(xì)胞不僅為組織工程膀胱、尿道提供種植細(xì)胞的必要手段，也是研究平滑肌瘤的基礎(chǔ)與前提。
本公司的兔膀胱平滑肌細(xì)胞采用*-膠原酶聯(lián)合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來(lái)，細(xì)胞總量約為5×10^5cells/瓶；細(xì)胞經(jīng)alpha-SMA免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
5.培養(yǎng)基信息：
DMEM[H]、FBS、平滑肌細(xì)胞生長(zhǎng)添加劑、Penicillin、Streptomycin等
| 細(xì)胞名稱 | 兔膀胱平滑肌細(xì)胞實(shí)驗(yàn)方法 |
| 規(guī)格 | 5×10^5cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 |
| 價(jià)格 | 來(lái)電可享受優(yōu)惠 |
優(yōu)勢(shì)：
1、細(xì)胞株種類(lèi)齊全，包括腫瘤細(xì)胞、正常細(xì)胞、耐藥細(xì)胞株，如：人滑膜細(xì)胞，人胃癌細(xì)胞，人細(xì)胞，人腎近曲小管上皮細(xì)胞，肝癌細(xì)胞，心肌細(xì)胞，子宮內(nèi)膜細(xì)胞等
2、*，專業(yè)的細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)指導(dǎo)
3、購(gòu)買(mǎi)本公司的細(xì)胞株，免費(fèi)復(fù)蘇
4、客戶收到細(xì)胞后一天回傳細(xì)胞圖片，三天回傳細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)圖片，五天內(nèi)有問(wèn)題公司負(fù)責(zé)重發(fā)，超過(guò)五天時(shí)限至一個(gè)月內(nèi)重發(fā)細(xì)胞收半價(jià)，超過(guò)一個(gè)月重發(fā)全額收費(fèi)。
5、經(jīng)濟(jì)、實(shí)惠、可靠，完善、穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)體系，優(yōu)秀的科研隊(duì)伍，*的實(shí)驗(yàn)設(shè)備、準(zhǔn)確可靠的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細(xì)胞株、抗體、血清、培養(yǎng)基、常用生化試劑、耗材。
操作步驟：
一．培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備：
1、準(zhǔn)備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號(hào)31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優(yōu)質(zhì)胎牛血清，10%。
2、培養(yǎng)條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養(yǎng)基，10%DMSO，現(xiàn)用現(xiàn)配。液氮儲(chǔ)存。
二、細(xì)胞處理：
1、復(fù)蘇細(xì)胞：將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過(guò)夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過(guò)夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
2、細(xì)胞傳代：如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
對(duì)于貼壁細(xì)胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤(rùn)洗細(xì)胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺(tái)，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4)將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(shí)(或隔夜)→液氮槽*儲(chǔ)存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設(shè)定程序之可程序降溫機(jī)中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲(chǔ)存。-20℃不可超過(guò)1小時(shí)，以防止冰晶過(guò)大，造成細(xì)胞大量死亡，也可跳過(guò)此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
PE-Cy3標(biāo)記的羊抗雞IgG CCR-1(CC chemokine receptor 1)
PE-CY5標(biāo)記的羊抗雞IgG CCR-3(CC chemokine receptor 3)
APC標(biāo)記的羊抗雞IgG CCR-2A(C-C Chemokine receptor 2A)
Alexa Fluor 350標(biāo)記的羊抗雞IgG CCR-4(C-C chemokine receptor 4)
羅丹明標(biāo)記的羊抗雞IgG CCR-6/CD196 peptide
膠體金標(biāo)記的羊抗雞IgG CXCR6(CXC-chemokine receptor 6) peptide
FITC標(biāo)記的羊抗雞IgG CCR-7(CC chemokine receptor 7)
堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的羊抗雞IgG CXCL10/IP-10
辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的羊抗雞IgG VEGF(Vascular endothelial growth factor)
堿性磷酸酶（AP）標(biāo)記的羊抗人IgG CD10/CALLA (Neutral Endopeptidase)
羅丹明標(biāo)記的羊抗人IgG ZCWCC1(Zinc finger CW-type coiled-coil domain protein 1)
Cy7標(biāo)記的羊抗人IgG CD138/Syndecan-1
PE標(biāo)記的羊抗人IgG CD146/MCAM
*標(biāo)記的羊抗人IgG ANPEN/CD13(Aminopeptidase N)
Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗人IgG CD14(cluster of differentiation antigen 14)
Alexa Fluor 647標(biāo)記的羊抗人IgG CD28
PE-Cy5.5標(biāo)記的羊抗人IgG CD166/ALCAM(activated leukocyte celladhesion molecule)
PE-Cy7標(biāo)記的羊抗人IgG CD177/NB1 peptide
Cy3標(biāo)記的羊抗人IgG CD24
Cy5標(biāo)記的羊抗人IgG CD2AP (CD2-associated protein)
Cy5.5標(biāo)記的羊抗人IgG CD33/Siglec-3(mouse ret)
PE-Cy3標(biāo)記的羊抗人IgG CD34
PE-CY5標(biāo)記的羊抗人IgG CD38(mouse, rat)
APC標(biāo)記的羊抗人IgG CD38(human)
釋放酶10 48T
PLC Gamma1(Human Phospholipase C Gamma1) ELISA Kit 人磷酯酶Cγ鏈 48T
NA(Human neuraminidase) ELISA Kit 人神經(jīng)氨酸酶 48T
PIPLC(Human phosphoinositide-specific phospholipase C) ELISA Kit 人磷酯酰肌醇特異性磷酯酶C 48T
PLC(Human Phospholipase C) ELISA Kit 人磷酯酶C 48T
Tyk-2(Human tyrosine kinase2) ELISA Kit 人*激酶2 48T
ICE(Human Interleukin 1 Beta converting enzyme) ELISA Kit 人白介素1β轉(zhuǎn)換酶 48T
ILK-1(Human integrin-linked kinase 1) ELISA Kit 人整合素連接激酶1 48T
CYP21B(Human Cytochrome P450c21/21-hydroxylase) ELISA Kit 人細(xì)胞色素P450c21B/21-羥化酶 48T
TdT(Human terminal deoxynucleotidyl transferase) ELISA Kit 人末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶 48T
IDO(Human indoleamine 2,3-dioxygenase) ELISA Kit 人吲哚胺2,3-雙加氧酶 48T
PRSS(Human serine protease) ELISA Kit 人*蛋白酶 48T
Syk(Human spleen tyrosine kinase) ELISA Kit 人脾臟*激酶 48T
STK(Human serine/threonine protein kinase) ELISA Kit 人*/*蛋白磷酸酶 48T
IRAK(Human interleukin receptor associated kinase) ELISA Kit 人白介素受體相關(guān)激酶 48T
UK(Human urokinase) ELISA Kit 人* 48T
PCK(Human phosphoenolpyruvate carboxykinase) ELISA Kit 人磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶 48T
Human trypsin ELISA Kit 人*
