細(xì)胞傳代步驟：
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細(xì)胞簡介：
兔血管外膜成纖維分離自血管外膜組織；血管外膜是由疏松結(jié)締組織組成，其中含螺旋狀或縱向分布的彈性纖維和膠原纖維。血管壁的結(jié)締組織細(xì)胞以成纖維細(xì)胞為主，當(dāng)血管受損傷時，成纖維細(xì)胞具有修復(fù)外膜的能力。有的動脈中膜和外膜的交界處，有密集的彈性纖維組成的外彈性膜。成纖維細(xì)胞（Fibroblast）是疏松結(jié)締組織的主要細(xì)胞成分，由胚胎時期的間充質(zhì)細(xì)胞分化而來。成纖維細(xì)胞較大，輪廓清楚，多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結(jié)構(gòu)，其細(xì)胞核呈規(guī)則的卵圓形，核仁大而明顯。成纖維細(xì)胞功能活動旺盛，細(xì)胞質(zhì)嗜弱堿性，具明顯的蛋白質(zhì)合成和分泌活動，在一定條件下，它可以實(shí)現(xiàn)跟纖維細(xì)胞的互相轉(zhuǎn)化；成纖維細(xì)胞對不同程度的細(xì)胞變性、壞死和組織缺損的修復(fù)有著十分重要的作用。剛分離的血管外膜成纖維細(xì)胞呈圓形、折光性良好，懸浮于培養(yǎng)基中。30min細(xì)胞貼壁，其中部分開始伸出偽足，表現(xiàn)為小的突起；6h后細(xì)胞基本貼壁，伸展成梭形，胞核清晰，分布較均勻，散在生長，不聚集成團(tuán)；細(xì)胞生長迅速，5-7天即呈融合狀態(tài)，細(xì)胞排列緊密，有的交叉重疊生長，平坦、胞體較大，細(xì)胞質(zhì)透明，細(xì)胞核較大，呈橢圓形，顏色淡。細(xì)胞融合，并彼此連接成網(wǎng)狀；細(xì)胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。血管外膜成纖維細(xì)胞是血管外膜的主要組成細(xì)胞之一，其主要生理功能合成和釋放細(xì)胞外基質(zhì)以及組織損傷后及時大量聚集修復(fù)損傷組織。
方法簡介：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔血管外膜成纖維采用-膠原酶混合消化法結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
公司實(shí)驗(yàn)室分離的兔血管外膜成纖維經(jīng)Vimentin免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | |
組織來源 | 血管組織 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7110 |
生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 成纖維細(xì)胞樣 |
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 成纖維細(xì)胞樣
傳代特性 可傳5代左右；3代以內(nèi)狀態(tài)佳
消化液 0.25%
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞復(fù)蘇步驟:
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠接觸蛋白4(CN4)試劑盒 ，英文名： CN4 ELISA Kit
Mouse neuophil elastase (NE) ELISA Kit 小鼠中性粒細(xì)胞彈性蛋白酶(NE)試劑盒
RatplateletmembraneglycoproteinⅡbⅢa,GP-ⅡbⅢaELISAKit 大鼠血小板膜糖蛋白ⅡbⅢa(GP-ⅡbⅢa/CD41+CD61)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
CLIAKitforFishi-iodothyronine,T3ELISAKit魚類三甲狀腺原
細(xì)胞基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-1)活性熒光定量試劑盒20次
RatovalbuminspecificIgE,OVAsIgEELISAKit大鼠卵清蛋白特異性IgE(OVAsIgE)試劑盒規(guī)格：96T/48T
小鼠過敏毒素/補(bǔ)體片斷4a(C4a)試劑盒 96T/48T
小鼠胱天蛋白酶9(Casp-9)試劑盒 96T/48T
小鼠胱天蛋白酶8(Casp-8)試劑盒 96T/48T
小鼠胱天蛋白酶3(Casp-3)試劑盒 96T/48T
2'-5'-寡腺苷酸合成酶2抗體
小鼠抗(AT)ELISA 試劑盒 96T/48T
Rat ai monocyte aibody (AMA) ELISA Kit 大鼠抗單核細(xì)胞抗體(AMA)試劑盒
HumanfibrinopeptideB,FPBELISAKit 人血纖肽/纖維蛋白肽B(FPB)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
HumanAmebiasis試劑盒人阿米巴(Amebiasis)試劑盒規(guī)格：96T/48T
植物單酚氧化酶(monophenolase)活性比色法定量試劑盒20次
MonkeyIerleukin2,IL-2ELISAKit猴白介素2(IL-2)試劑盒規(guī)格：96T/48T
尿皮質(zhì)素UCN3抗體
ERBB2重組恒河猴 HER2 / ErbB2 蛋白 Protein
P19ARF p19ARF抑癌基因抗原 0.5mgP19ARF p19ARF抑癌基因抗原
CA8重組人 Carbonic Anhydrase VIII / CA8 蛋白 Protein
DNASE1 Protein Human 重組人 DNASE1 / Deoxyribonuclease I / DNL1 蛋白
IFNA5 Protein Mouse 重組小鼠 IFNA5 / IFNaG 蛋白
兔血管外膜成纖維細(xì)胞P19ARF p19ARF抑癌基因抗原 0.5mgP19ARF p19ARF抑癌基因抗原
DNASE1 Protein Human 重組人 DNASE1 / Deoxyribonuclease I / DNL1 蛋白
ERBB2重組恒河猴 HER2 / ErbB2 蛋白 Protein
IFNA5 Protein Mouse 重組小鼠 IFNA5 / IFNaG 蛋白
CA8重組人 Carbonic Anhydrase VIII / CA8 蛋白 Protein
細(xì)胞凍存步驟:
待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；
1．細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。
