土壤淀粉/酶試劑盒-微量法注意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義
淀粉/酶(EC3.2.1.1)是催化淀粉水解的一類酶的總稱。土壤中的淀粉/酶主要來自于微生物, 是一種重要的酶制劑,廣泛應用于糧食加工、食品、釀造、發酵、紡織品工業和醫藥行業。
測定原理
淀粉/酶水解淀粉產生還原糖,可與 3,5-二硝基水楊酸反應生成紅棕色物質,在 540nm 處有特征吸收峰,顏色深淺在一定范圍內與還原糖量成正比。
土壤淀粉/酶試劑盒-微量法需自備的儀器和用品
天平、水浴鍋、低溫離心機、酶標儀、96 孔板、甲苯。
試劑的組成和配制
試劑一:液體 12mL×1 瓶,4℃保存。
試劑二:液體 8mL×1 瓶,4℃保存。若出現沉淀析出,需 70℃加熱溶解后再用。試劑三:液體 14mL×1 瓶,4℃保存。
樣品處理:
新鮮土樣自然風干或 37℃烘箱風干,過 30~50 目篩。
土壤淀粉/酶試劑盒-微量法測定加樣表:
對照管 | 測定管 | |
土樣(g) | 0.04 | 0.04 |
甲苯(μL) | 20 | 20 |
25℃靜置 15min | ||
試劑一(μL) | 100 | 100 |
試劑二(μL) | 120 | |
蒸餾水(μL) | 120 | |
充分混勻,37℃反應 24h,8000rpm,25℃,離心 10min | ||
上清液(μL) | 120 | 120 |
試劑三(μL) | 120 | 120 |
充分混勻,90℃水浴 5min,待冷卻后,取 200μL 于 96 孔板中測定 540nm 處吸光值, 分別記為A 對照管和A 測定管,△A=A 測定管-A 對照管。每個測定管設一個對照管。 |
土壤淀粉/酶試劑盒-微量法計算公式
標準曲線:y = 0.1263x - 0.034,R2 = 0.9917;x 為標準品濃度,mg/mL,y 為吸光值ΔA。酶活單位定義:每 g 土樣每天催化生成 1mg 還原糖為一個酶活力單位。
S-AL(mg/d/g 土樣)=(△A +0.034)÷ 0.1263×V 反總÷W÷T
=47.51×(△A +0.034)
V 反總:反應體系總體積,0.24mL;T:反應時間,1d; W:樣本質量,0.04g。