土壤全硼試劑盒注意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義
硼是植物生長發育必需的七種微量營養元素之一,土壤中硼素的含量高低直接影響著植物的生長狀況。
測定原理
硼與甲亞胺在弱酸條件下形成棕黃色配合物,在 420nm 有特征吸收峰。
自備實驗用品及儀器
天平、常溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、馬弗爐、微量石英比色皿/96 孔板。
土壤全硼試劑盒試劑組成和配制
提取劑:粉劑×1 瓶,4℃保存。
提取液:液體 100mL×4 瓶,4℃保存。
試劑一:粉劑×1 瓶,4℃保存。臨用前加 8mL 水溶解,加 0.125mL 乙酸。試劑二:粉劑×1 瓶,4℃避光保存。臨用前加 4mL 蒸餾水溶解。
樣本處理
新鮮土樣風干,過 100 目篩,按照土壤質量(g):提取 劑質量(g)為 1:4 的比例(建議稱取約 0.1g 土樣,加入 0.4g 提取劑)緩慢加入提取劑于坩堝中,邊加邊攪拌均勻,然后在馬弗爐中 550℃熔融 10min,然后在 920℃熔融 30min,趁熱取出坩堝,將熔融物轉入燒杯,邊攪拌邊加 4mL 提取液,必要時加蓋,防止溶液濺出,溶解 30min 后,5000g ,25℃離心 10min,取上清液待測。
土壤全硼試劑盒測定操作表
空白管 | 測定管 | |
樣本(μL) | 40 | |
試劑一(μL) | 80 | 80 |
試劑二(μL) | 40 | 40 |
H2O(μL) | 80 | 40 |
充分混勻,25℃黑暗中靜置 1h | ||
于微量石英比色皿/96 孔板,蒸餾水調零,測定 420nm 處吸光值 A,分別記為 A 空白 管和A 測定管,△A=A 測定管-A 空白管 |
計算公式
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下標準曲線:y = 0.3897x - 0.2359,R2 = 0.9995
全硼含量(mg/kg)=(△A+0.2359)÷ 0.3897×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總)
= 51.32×(△A+0.2359)÷W
V 反總:反應總體積,0.2mL;V 樣:反應體系中加入樣本體積,0.04mL;V 樣總:加入提取液體積,4mL,W:樣本質量,g
b.用 96 孔板測定的計算公式如下
標準曲線:y = 0.1949x - 0.2359,R2 = 0.9995
全硼含量(mg/kg)=(△A+0.2359)÷ 0.1949×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總)
=102.64×(△A+0.2359)÷W
V 反總:反應總體積,0.2mL;V 樣:反應體系中加入樣本體積,0.04mL;V 樣總:加入提
取液體積,4mL,W:樣本質量,g
土壤全硼試劑盒注意事項
1.配制好的試劑二 4℃保存不可超過 7 天。
2.顯色時嚴格控制溫度并且避光,以免顯色劑見光分解。