中性、堿性土壤速效磷試劑盒-微量法測定意義
速效磷是土壤中可被植物吸收的磷組分，包括全部水溶性磷、部分吸附態磷及有機態磷，土壤中速效磷是限制植物生長主要因子之一。
測定原理
用弱堿性提取堿溶性磷和吸附態磷，用鉬銻抗比色法測定。
自備實驗用品及儀器
天平、常溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、震蕩儀。
中性、堿性土壤速效磷試劑盒-微量法試劑組成和配制
提取液：液體 105mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 6mL×1 支，4℃保存。
試劑二： 粉劑×1 支，4℃避光保存。臨用前加 2mL 蒸餾水溶解。用不完的試劑 4℃保存。
試劑三： 粉劑×3 支，4℃避光保存。臨用前加 1mL 蒸餾水溶解。現配現用。
樣本處理
新鮮土樣風干，過 30-50 目篩，按照土壤質量（g）：提取液體積(mL)為 1：20 的比例（建議稱取約 0.05g 土樣，加入 1mL 提取液），振蕩提取 1h，10000g ，25℃離心 10min，取上清液待測。
中性、堿性土壤速效磷試劑盒-微量法測定步驟
1、 顯色液的配制（可測 50 個樣）：取 EP 管一支，加入 660μL 試劑一，再加入 100μL 試劑二，充分混勻后，再加入 240μL 試劑三，充分混勻待用；配好的顯色液應為黃色，若變藍則為磷污染；顯色液必須現配現用；若一次性測不了 50 個樣，可按比例縮小各試劑體積。
2、 操作表
空白管 | 測定管 | |
樣本（μL） | 40 | |
提取液（μL） | 40 | |
顯色液（μL） | 20 | 20 |
H2O（μL） | 140 | 140 |
充分混勻，25℃靜置 30min | ||
于微量石英比色皿/96 孔板中，蒸餾水調零，測定 660nm 處吸光值 A，分別記為 A 空 白管和 A 測定管，△A=A 測定管-A 空白管。空白管只要做一管。 | ||
計算公式
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準曲線：y = 0.1164x-0.012，R2 = 0.9958，x 為標準品濃度（mg/L），y 為吸光值。速效磷含量（mg/kg 干重）=（△A+0.012）÷ 0.1164×V 樣÷（W×V 樣÷V 樣總）
= 8.591×（△A+0.012）÷W
V 樣：加入反應體系中樣本體積，0.04mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質量， 約 0.05g
b.用 96 孔板測定的計算公式如下
標準曲線：y = 0.0582x-0.012，R2 = 0.9958，x 為標準品濃度（mg/L），y 為吸光值。
速效磷含量（mg/kg 干重）=（△A+0.012）÷ 0.0582×V 樣÷（W×V 樣÷V 樣總）
= 17.182×（△A+0.012）÷W
V 樣：加入反應體系中樣本體積，0.04mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL，W：樣本質量， 約 0.05g
中性、堿性土壤速效磷試劑盒-微量法注意事項
1.配好的顯色液當天用完，變藍則不能使用。
2.最/低檢出限為 0.2μg/mL。
