土壤亮氨/酸氨基肽酶(S-LAP)試劑盒-微量法注意：正式測(cè)定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一：液體30mL×1瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1瓶，4℃避光保存；臨用前加入3mL丙/酮溶解。
產(chǎn)品說(shuō)明：
S-LAP是一類能水解肽鏈N-末端為亮氨/酸的酶，由土壤微生物分泌。S-LAP活性變化與機(jī)體某些病理狀態(tài)密切相關(guān)。
S-LAP分解L-亮氨/酸對(duì)硝基苯胺生成對(duì)硝基苯胺，后者在405nm有最大吸收峰，通過(guò)測(cè)定吸光值升高速率來(lái)計(jì)算S-LAP活性。
土壤亮氨/酸氨基肽酶(S-LAP)試劑盒-微量法自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量玻璃比色皿/96孔板、甲苯、丙/酮、30目篩（或更?。?/span>
操作步驟：
一、樣本處理
土樣自然風(fēng)干，過(guò)30-50目篩。
二、測(cè)定步驟
1、分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀預(yù)熱30min以上，波長(zhǎng)調(diào)至405nm，蒸餾水調(diào)零。
2、加樣表：
測(cè)定管 | 對(duì)照管 | |
土樣（g） | 0.03 | 0.03 |
甲苯（µL） | 15 | 15 |
震蕩混勻，室溫靜置15min。 | ||
試劑一（µL） | 255 | 255 |
試劑二（µL） | 30 | - |
30℃水浴反應(yīng)1h后立刻煮沸5min。流水冷卻至室溫。 | ||
試劑二（µL） | - | 30 |
14000g 常溫離心10min，取200µL上清于405nm處測(cè)定吸光值，分別記為A測(cè)定管、A對(duì)照管，計(jì)算?A=A測(cè)定管-A對(duì)照顧管。 | ||
土壤亮氨/酸氨基肽酶(S-LAP)試劑盒-微量法三、酶活計(jì)算公式
1.按微量比色皿計(jì)算：
酶活性定義：每克土壤每分鐘生成1nmol 對(duì)硝基苯胺為一個(gè)酶活力單位。
S-LAP 活性（U/g）=△A÷(ε×d) ×109×V反總÷W÷T=0.507×△ A÷W 。
ε：對(duì)硝基苯胺摩爾消光系數(shù)：9.87×103 L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V 反總：反應(yīng)總體積，300µL=3×10-4 L；W：土樣質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，60min；109：?jiǎn)挝粨Q算系數(shù)，1mol=109nmol。
2.按96孔板計(jì)算：
酶活性定義：每克土壤每分鐘氧化1nmol 對(duì)硝基苯胺為一個(gè)酶活力單位。
S-LAP 活性（U/g）=△A÷(ε×d) ×109×V反總÷W÷T=0.844×△ A÷W 。
ε：對(duì)硝基苯胺摩爾消光系數(shù)：9.87×103 L/mol/cm；d：96 孔板光徑，0.6cm；V 反總：反應(yīng)總體積，300µL=3×10-4 L；W：土樣質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，60min；109：?jiǎn)挝粨Q算系數(shù)，1mol=109nmol。土壤亮氨/酸氨基肽酶(S-LAP)試劑盒-微量法
