土壤β-木糖苷酶(S-β-XYS)試劑盒注意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
測定意義
β-木糖苷酶(EC3.2.1.37)存在于植物、細菌和真菌等生物體,是催化木聚糖類半纖維素降解
的關鍵酶,產物木糖可作為碳源應用于微生物發酵。另外,β-木糖苷酶還可以作為生物漂 白劑應用于造紙工業,比傳統的漂白法環保,具有廣泛的應用價值。
測定原理
S-β-XYS 催化對硝基苯fen-β-D-木糖苷產生對硝基苯fen,對硝基苯fen在 405nm 處有特征吸收峰,測定 405nm 光吸收增加速率,可計算 S-β-XYS 活性。
土壤β-木糖苷酶(S-β-XYS)試劑盒自備實驗用品及儀器
天平、低溫離心機、可見分光光度計、1 mL 玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制
提取液:液體 50mL×1 瓶,4℃保存。
試劑一:液體 2mL×1 瓶,4℃避光保存。試劑二:液體 20mL×1 瓶,4℃保存。試劑三:液體 20mL×1 瓶,4℃保存。
粗酶液提取:
約 0.1g 鮮土或風干土樣,加入 1mL 提取液進行冰浴勻漿,室溫振蕩提取 30min,然后10000g, 4℃,離心 10min,取上清待測。
土壤β-木糖苷酶(S-β-XYS)試劑盒測定操作表:
1、分光光度計預熱 30min,調節波長至 405nm。
2、操作表
對照管 | 測定管 | |
樣本(μL) | 200 | 200 |
試劑一(μL) | 50 | |
試劑二(μL) | 400 | 350 |
混勻,45℃水浴 20min | ||
試劑三(μL) | 400 | 400 |
混勻,靜置 5min,405nm 處測定吸光值 A,計算 ΔA=A 測定管-A 對照管。每個測定管設一 個對照管。 |
β-木糖苷酶活性
標準曲線:y=13.226x+0.0011,R2=0.9998;x 為標準品濃度(μmol/mL),y 為吸光值ΔA。酶活定義:每克土樣每天催化產生 1μmol 對硝基苯fen的酶量為一個酶活單位。
β-木糖苷酶活性(μmol/d /g 土樣)=(ΔA-0.0011) ÷13.226×V 反總÷(V 樣÷V 樣總×W)÷T
=16.33×(ΔA-0.0011)÷W
V 樣總:加入提取液體積,1mL; V 反總:反應總體積,0.6mL;V 樣:反應中樣品體積,
0.2mL; W:樣品質量,g;T:反應時間,20min=1/72d;
ΔA 控制在 0.01-2 范圍內,若ΔA 大于 2,可適當減小樣本量。標準曲線線性范圍為:0.01μmol/mL-0.5μmol/mL。土壤β-木糖苷酶(S-β-XYS)試劑盒