土壤酸性磷酸酶(S-ACP)試劑盒-分光光度法注意：正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。

規格: 50T/48S

產品內容：

試劑一：液體 21mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。用前加 50mL 蒸餾水充分溶解。

試劑三：液體 11mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：粉劑×1 支，4℃避光保存。臨用前加 1152µL 無水乙醇（自備），48 µL 蒸餾水充分溶解。（變褐色后不能再使用）

標準品：液體 1mL×1 瓶，0.5 µmol/mL 苯fen標準液，4℃保存。

土壤酸性磷酸酶(S-ACP)試劑盒-分光光度法產品說明：

土壤磷酸酶是一類催化土壤有機磷礦化的酶，其活性的高低直接影響著土壤中有機磷的分解轉化及其生物有效性，是評價土壤磷素生物轉化方向與強度的指標。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH 顯著影響，根據最適pH 范圍，通常分為酸性、中性和堿性三種類型。酸性環境中， S- ACP 催化磷酸苯二鈉水解生成苯分和磷酸氫2鈉，通過測定酚的生成量即可計算出S-ACP 活性。

試驗中所需的儀器和試劑：

可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿、臺式離心機、37℃恒溫培養箱、分析天平、可調式移液器、冰、蒸餾水、乙醇和甲苯。

操作步驟：

一、粗酶液提取：

稱取風干混勻土壤約 0.1g，加入0.05mL 甲苯（自備），輕搖15min；加0.4 mL 試劑一并且搖勻后，置于37℃恒溫培養箱，開始計時，催化反應 24h；到時后迅速加入 1mL 試劑二充分混勻，以終止酶催化的反應。8000rpm，25℃離心10min，取上清液置于冰上待測。

土壤酸性磷酸酶(S-ACP)試劑盒-分光光度法二、測定步驟：

1、可見分光光度計預熱 30 min 以上，調節波長到 660 nm，蒸餾水調零。

2、空白管：取1mL 玻璃比色皿，加入 50 µL 試劑一，200 µL 試劑三，20 µL 試劑四，充分混勻， 顯色后再加蒸餾水 730 µL，混勻后室溫靜置 30 min，于660 nm 測定吸光度，記為A 空白管。

3、標準管：取1mL 玻璃比色皿，加入 50 µL 標準液，200 µL 試劑三，20 µL 試劑四，充分混勻， 顯色后再加蒸餾水 730 µL，混勻后室溫靜置 30 min，于660 nm 測定吸光度，記為A 標準管。

4、測定管：取1mL 玻璃比色皿，加入50 µL 上清液，200µL 試劑三，20 µL 試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水730 µL，混勻后室溫靜置 30 min，于660 nm 測定吸光度，記為A 測定管。

注意：空白管和標準管只需測定一次。

土壤酸性磷酸酶(S-ACP)試劑盒-分光光度法三、S-ACP 活性計算：

活性單位定義：37℃中每克土壤每天釋放 1nmol 酚為 1 個酶活單位。

S-ACP（nmol/d/g）=[C標準液×(A測定管－A空白管)÷(A標準管－A空白管)]×V總×1000÷W÷T

=725×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標準管－A 空白管)÷W

C 標準液：0.5 µ mol/mL； V 總：催化體系總體積，1.45mL；W：土壤樣品質量，g；T：催化反應時間，24 h=1 d；1000：單位換算系數，1µmol=1000nmol。

注：線性范圍為 0.03125µmol/mL-1.5µmol/m