土壤纖維素酶(S-CL)試劑盒-可見分光光度法注意:正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
規格: 50T/24S
產品說明:
S-CL主要來源于土壤微生物,S-CL催化農作物秸稈產生的葡萄糖是主要的碳源營養物質。本產品采用3.5-二硝基水楊酸法測定S-CL催化纖維素降解產生的還原糖的含量。
土壤纖維素酶(S-CL)試劑盒-可見分光光度法產品內容:
試劑一:甲苯10mL×1 瓶,4℃保存;(自備) 試劑二:液體15mL×1 瓶,4℃保存;
試劑三:液體50mL×1 瓶,4℃保存; 試劑四:液體15mL×1 瓶,4℃保存;
標準品:粉劑×1 支,4℃保存,含 10mg 無shui葡萄糖(干燥失重<0.2%),臨用前加入 1mL 蒸餾水溶解,配制成 10mg/mL 葡萄糖溶液備用,4℃可保存 1 周,或者用飽和苯甲酸溶液溶解,可保存更長時間。
標準品準備:將標準品用蒸餾水稀釋至 1、0.8、0.6、0.4、0.2、0.1mg/mL。
自備的儀器和用品:
可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、甲苯(不允許快遞)和蒸餾水
土壤纖維素酶(S-CL)試劑盒-可見分光光度法操作步驟:
1、分光光度計預熱 30min 以上,調節波長至 540nm,蒸餾水調零。
2、加樣表和測定步驟:
對照管 | 測定管 | 標準管 | 空白管 | ||
風干土樣(g) | 0.25 | 0.25 | - | ||
試劑一(μL) | 125 | 125 | - | ||
煮沸15min(蓋緊) | 振蕩混勻,室溫放置15min | - | |||
試劑二(μL ) | 250 | 250 | - | ||
試劑三(μL ) | 1000 | 1000 | - | ||
蒸餾水(μL ) | 250 | 250 | - | ||
振蕩混勻,40℃水浴糖化1h 后,煮沸15min(蓋緊,防止水分散失),得糖化液 | |||||
糖化液(μL) | 50 | 50 | - | ||
標準液(μL) | - | - | 50 | ||
蒸餾水(μL) | 50 | ||||
試劑四(μL) | 150 | 150 | 150 | 150 | |
混勻, 沸水浴中煮沸顯色15min(蓋緊,防止水分散失),冷卻 | |||||
蒸餾水(μL) | 1050 | 1050 | 1050 | 1050 | |
混勻,540nm 處蒸餾水調零,測定吸光值A,樣品管計算ΔA=A測定管-A對照管 |
標準曲線的建立:540nm 處蒸餾水調零,讀標準管吸光值ΔA=A 標準管-A 空白管。以濃度(y) 為縱坐標,吸光度ΔA(x)為橫坐標建立標準曲線。
土壤纖維素酶(S-CL)試劑盒-可見分光光度法活力計算:
根據標準曲線,將樣品ΔA 帶入公式中(x)計算樣品濃度 y(mg/mL)。單位的定義:每天每 g 土樣中產生 1mg 葡萄糖定義為一個酶活力單位。S-CL 活力(U/g)=y×V 反總÷W÷T =156×y
T:反應時間,1h=1/24d; V 反總:反應體系總體積:1.625mL;W:樣本質量,0.25g。
注意事項:若樣品測定管吸光度過小(0.02),可延長反應時間,即 40℃水浴糖化時間,最后計算時加以換算即可。