淀粉分支酶（SBE）檢測試劑盒微量法活性說明書
測定意義：
SBE（EC 2.4.1.18）主要存在于植物中，是參與支鏈淀粉合成的關(guān)鍵酶，測定 SBE 活性在淀粉生物合成、優(yōu)質(zhì)農(nóng)作物品種選育和品質(zhì)遺傳改良研究中具有重要意義。
測定原理：
直鏈淀粉和碘結(jié)合后在 660nm 有特征光吸收，SBE 使直鏈淀粉含量減少，從而降低了淀粉
-碘復合物在 660nm 吸收值，一定時間內(nèi)吸光度下降的百分率可以反映 SBE 活性。
自備實驗用品及儀器：
可見分光光度計/酶標儀、水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研缽、冰、蒸餾水
試劑的組成和配制：
提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存； 試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 支，4℃保存；臨用前每支加入 1mL 蒸餾水，95℃沸水浴充分溶解后備用；用不完的試劑 4℃保存；
試劑三：液體 13mL×1 瓶，4℃保存； 試劑四：液體 1mL×支，4℃避光保存；
淀粉分支酶（SBE）檢測試劑盒粗酶液提取：
按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL提取液），進行冰浴勻漿。15000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。
測定步驟：
1、分光光度計預熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長到 660 nm，蒸餾水調(diào)零。
2、加樣表
試劑名稱（μ L） | 對照管 | 測定管 |
95℃水浴 1min 后滅活的粗酶 液 | 65 |
|
粗酶液 |
| 65 |
試劑一 | 85 | 85 |
試劑二 | 10 | 10 |
淀粉分支酶（SBE）檢測試劑盒混勻，37℃準確保溫 20 min，置 95℃水浴中 5 min（蓋緊，防止水分散失），冷卻
試劑三 | 130 | 130 |
試劑四 | 10 | 10 |
混勻，室溫靜置 10min，取 200uL 至微量石英比色皿或 96 孔板中，660nm 處讀取各管吸光值。每個測定管需設個一個對照管。
注意：
1、可以在不同對照管中加入不同樣品的粗酶液，然后集中進行 5min 95℃沸水浴處理。
2、試劑二如有沉淀，務必沸水浴溶解后使用。
SBE 活力單位的計算：
1、按照蛋白濃度計算
單位的定義：以波長 660nm 的吸光度下降百分率表示，每 mg 蛋白在反應體系中每降低 1％碘藍值為一個酶活性單位。
SBE 活性(U/mg prot)=( A 對照管-A 測定管)/A 對照管÷Cpr ×100 2、按照樣本鮮重計算
單位的定義：以波長 660nm 的吸光度下降百分率表示，每g 組織在反應體系中每降低 1％碘藍值為一個酶活性單位。
淀粉分支酶（SBE）檢測試劑盒SBE 活性(U/g 鮮重)=(A 對照管-A 測定管)/A 對照管÷(W÷V 樣總)×100
V 樣總：提取液總體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g。
