二胺氧化酶檢測試劑盒微量法活性說明書

注意：正式測定之前選擇2-3個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

DAO(EC1.4.3.6)廣泛存在于動物（腸粘膜、肺、肝臟、腎臟等）、植物和微生物中。催化多胺氧化為醛，其活性與核酸和蛋白合成密切相關，能夠反映腸道機械屏障的完整性和受損傷程度。

測定原理：

DAO 催化尸胺產生醛和過氧化氫，外源添加過量的辣根過氧化物酶，催化過氧化氫氧化鄰聯茴香胺生成氧化型鄰聯茴香胺，在 460nm 處有特征吸收峰，通過測定該波長吸光度增加速率， 計算 DAO 活性。

自備實驗用品及儀器：

天平、低溫離心機、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、蒸餾水。

二胺氧化酶檢測試劑盒試劑組成和配制：

提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。試劑一：液體 0.25mL×1 支，4℃保存。

試劑二：液體 2mL×1 管，4℃保存。

試劑三：液體 1mL×1 管，4℃保存。

粗酶液提?。?/span>

1. 組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液）進行冰浴勻漿，然后 10000g，4℃離心 20min，取上清，置冰上待測。

2. 細菌、真菌：按照細胞數量（104 個）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500萬細胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 10000g，4℃，離心 10min，取上清置于冰上待測。

3. 血清等液體：直接測定。

二胺氧化酶檢測試劑盒測定操作表：

1、分光光度計/酶標儀預熱 30min，調節波長至 460nm，蒸餾水調零。

2、操作表