磷脂酶D（PLD）檢測(cè)試劑盒測(cè)定意義：

磷脂酶 D（EC3.1.4.4）即磷脂酰膽堿水解酶，是催化磷酸二酯鍵水解和堿基交換反應(yīng)的一類酶的總稱，廣泛存在于高等動(dòng)植物和細(xì)菌等多種生物體中，具有參與細(xì)胞脂質(zhì)代謝、信號(hào)傳導(dǎo)、生物膜形成的抗逆境脅等生理功能。
磷脂酶D（PLD）檢測(cè)試劑盒測(cè)定原理：
磷脂酶D 催化水解磷脂酰膽堿末端的磷脂酰二酯鍵生成磷脂酸和膽堿，膽堿在膽堿氧化酶催化作用下生成甜菜堿和過氧化氫，過氧化氫在過氧化氫酶的作用下將 4-氨基安替比林和重蒸酚氧化成粉紅色物質(zhì)，在500nm 處有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
天平、研缽、超速冷凍離心機(jī)、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、微量石英比色皿/96 孔板、恒溫水浴鍋、無水乙醇。
試劑組成和配制 ：
提取液：液體 100mL×1 瓶，4℃保存。試劑一：液體 102mL×瓶，4℃避光保存。試劑二：液體 3mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑三：粉劑×1 支，-20℃避光保存。臨用前加 1mL 無水乙醇充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。
試劑四：液體 15mL×1 瓶，4℃避光保存。標(biāo)準(zhǔn)品：液體 1mL×1 支，4℃避光保存。
磷脂酶D（PLD）檢測(cè)試劑盒酶液提取：
1. 組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1mL 提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于 4℃，10000g 離心 5min，取全部上清于 4℃、100000g 離心 30min，棄上清，取沉淀溶于 1mL 試劑一。
2. 細(xì)胞：按照細(xì)胞數(shù)量（104 個(gè)）：提取液體積（mL）為 500~1000：1 的比例（建議 500 萬細(xì)胞加入 1mL 提取液），冰浴超聲波破碎細(xì)胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時(shí)間 3min）；然后于 4℃，10000g 離心5min，取全部上清于 4℃、100000g 離心 30min，棄上清，取沉淀溶于 1mL 試劑一。
3. 血清：直接測(cè)定。磷脂酶D（PLD）檢測(cè)試劑盒