游離膽固醇(FC)檢測試劑盒測定意義:
FC 氧化酶催化 FC 生成△4-膽甾烯酮和 H2O2,過氧化物酶催化 H2O2、4-氨基安替比林和酚生成紅色醌類化合物,在 500nm 有吸收峰,其顏色深淺與 FC 含量成正比。
自備實驗用品及儀器:
水浴鍋、可調式移液槍、可見分光光度計/酶標儀、微量石英比色皿/96 孔板、和蒸餾水。
試劑組成和配置:
試劑一:異丙醇 100mL(自備);
工作液:液體 20mL×1 瓶,4℃保存;
標準品:液體 1mL×1 支,濃度為 0.5 μ mol/mL,4℃避光保存。
FC 的提取:
1. 組織:按照組織質量(g):試劑一體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 試劑一)進行冰浴勻漿。8000g,4℃離心 10min,取上清置冰上待測。
2. 細菌、真菌:先收集 400-500 萬細胞或細菌到離心管內,棄上清,加 1mL 試劑一,超聲波破碎 1min(強度20%,超聲 2s,停 1s),即 FC 待測液。
3. 血清(漿)樣品:直接測定。
游離膽固醇(FC)檢測試劑盒測定操作:
1. 分光光度計/酶標儀預熱 30 min,調節波長到 500 nm,蒸餾水調零。
2. FC 工作液在 40℃水浴中預熱 30min。
3. 標準管:依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 50μ L FC 標準液和 150μ L FC 工作液,混勻,靜置24h 后于 500nm 測定 A 標準管。
4. 測定管:依次在微量石英比色皿/96 孔板中加入 50μ L FC 待測液和 150μ L FC 工作液,混勻,靜置24h 后于 500nm 測定 A 測定管。
游離膽固醇(FC)檢測試劑盒計算公式:
1. 血清(漿)中 FC 含量計算:
FC 含量(μ mol /dL)= C 標準液×A 測定管÷A 標準管×100mL
=50×A 測定管÷A 標準管 C 標準液:0.5μ mol/mL;100 mL:1dL=100 mL。
2. 組織中 FC 含量計算: (1)按樣本蛋白濃度計算
FC 含量(μ mol / mg prot)= C 標準液×A 測定管÷A 標準管÷Cpr
= 0.5×A 測定管÷A 標準管÷Cpr
(2)按樣本鮮重計算
FC 含量(μ mol / g 鮮重)= C 標準液×A 測定管÷A 標準管÷W
= 0.5×A 測定管÷A 標準管÷W
C 標準液:0.5μ mol/mL;Cpr:樣本蛋白濃度,mg/mL;W:樣本質量,g/mL
3. 細胞、細菌中 FC 含量計算:
FC 含量(μ mol /104 cell)= C 標準液×A 測定管÷A 標準管÷細菌或細胞(104 cell /L)
=0.5×A 測定管÷A 標準管÷細菌或細胞(104 cell /L) C 標準液:0.5μ mol/mL。
游離膽固醇(FC)檢測試劑盒檢出限為 1nmol/mL