土壤α-葡萄糖苷酶(S-α -GC)檢測試劑盒說明書,正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義:
S-α -GC 能夠催化水解芳基或烴基與糖基原子團之間的糖苷鍵生成葡萄糖,是纖維素分解酶系中重要組成成分之一,在土壤微生物的糖類代謝方面具有重要生理功能。
測定原理:
S-α -GC 能夠催化對-硝基苯-α -D-吡喃葡萄糖苷生成對-硝基苯酚,后者在 400nm 有特征光吸收。
自備實驗用品及儀器:
可見分光光度計/酶標儀、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、甲苯(不允許快遞)和蒸餾水。
土壤α-葡萄糖苷酶(S-α -GC)檢測試劑盒試劑組成和配制:
試劑一:甲苯 5mL×1 瓶,4℃保存;(自備)
試劑二:粉劑×1 瓶,-20℃保存;臨用前加入 10mL 蒸餾水,充分溶解備用,用不完的試劑仍-20℃保存;
試劑三:液體 20mL×1 瓶,4℃保存; 試劑四:液體 15mL×1 瓶,4℃保存;
樣品處理:
新鮮土樣自然風干或 37 度烘箱風干,過 30~50 目篩。
測定步驟:
1、分光光度計或酶標儀預熱 30min 以上,調節波長至 400nm,蒸餾水調零。
2、加樣表
試劑名稱 | 測定管 | 對照管 |
風干土樣(g) | 0.02 | 0.02 |
試劑一(μ L) | 10 | 10 |
| 室溫振蕩混勻 15min | 90℃振蕩混勻 15min |
試劑二(μ L) | 130 |
|
蒸餾水 |
| 130 |
試劑三(μ L) | 160 | 160 |
混勻, 37℃振蕩反應 1h 后,90℃水浴 5min(蓋緊,防止水分散失),流水冷卻, 10000g 25℃離心 10min,取上清液(在 EP 管或 96 孔板中加入下列試劑)
上清液(μ L) | 70 | 70 |
試劑四(μ L) | 130 | 130 |
充分混勻,室溫靜置 2min 后, 400nm 處測定吸光值 A,計算 Δ A=A 測定管-A 對照管。每個測定管設一個對照管。
土壤α-葡萄糖苷酶(S-α -GC)檢測試劑盒S-α-GC 活力計算:
a.用微量石英比色皿測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為 y = 0.0032x -0.0027;x 為標準品濃度(μ mol/L),y 為吸光值。
單位的定義:每天每g 土樣中產生 1 μ mol 對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。
S- α -GC 活 力 ( μ mol/d/g 土 樣 ) = (Δ A+0.0027) ÷0.0032×V 反 總 ÷W÷T
=112.5×(Δ A+0.0027)
T:反應時間,1h=1/24d; V 反總:反應體系總體積:3×10-4 L;W:樣本質量,0.02g。b.用 96 孔板測定的計算公式如下
標準條件下測定的回歸方程為 y = 0.0016x -0.0027;x 為標準品濃度(μ mol/L),y 為吸光值。
單位的定義:每天每g 土樣中產生 1 μ mol 對-硝基苯酚定義為一個酶活力單位。
S- α -GC 活力( μ mol/d /g 土樣)= (Δ A+0.0027) ÷0.0016×V 反總 ÷W÷T
=225×(Δ A+0.0027)
土壤α-葡萄糖苷酶(S-α -GC)檢測試劑盒T:反應時間,1h=1/24d; V反總:反應體系總體積:3×10-4 L;W:樣本質量,0.02g。