土壤中性蛋白酶（S-NPT）檢測試劑盒說明書，正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
土壤蛋白酶參與土壤中存在的氨基酸、蛋白質(zhì)以及其他含蛋白質(zhì)氮的有機(jī)化合物的轉(zhuǎn)化， 其水解產(chǎn)物是高等植物的氮源之一。S-NPT 在中性環(huán)境下催化蛋白質(zhì)水解，與土壤有機(jī)質(zhì)含量、氮素及其他土壤性質(zhì)有關(guān)。
測定原理：
中性條件下，S-NPT 可將酪蛋白水解產(chǎn)生酪氨酸；在堿性條件下，酪氨酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍(lán)；在 680nm 有特征吸收峰。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器：
可見分光光度計/酶標(biāo)儀、水浴鍋、磁力攪拌器、可調(diào)式移液槍、微量石英比色皿/96 孔板、雙蒸水
土壤中性蛋白酶（S-NPT）檢測試劑盒試劑組成和配置：
試劑一：液體 30mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 5ml 蒸餾水充分溶解；用不完的試劑 4℃保存； 試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 50μ L 試劑七使粉劑潤濕，然后加入 10ml 試
劑一，轉(zhuǎn)入燒杯中沸水浴磁力攪拌溶解后待用；用不完的試劑 4℃保存；
試劑四：粉劑×1 瓶，4℃保存；臨用前加入 20ml 蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑 4℃ 保存；
試劑五：液體 3mL×1 瓶，4℃保存；
試劑六：液體 1.5mL×1 支，0.05mg/ml 標(biāo)準(zhǔn)酪氨酸溶液，4℃避光保存； 試劑七：液體 1.5mL×1 支，4℃保存；
樣品處理：
新鮮土樣自然風(fēng)干或 37 度烘箱風(fēng)干，過 30~50 目篩。
測定操作：
1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 680nm，蒸餾水調(diào)零。
2、試劑二、三和四 40℃水浴 10min。
3、樣本測定：
試劑名稱 | 測定管 | 對照管 |
風(fēng)干土樣（g） | 0.01 | 0.01 |
試劑一（μ L） | 50 | 150 |
試劑三（μ L） | 100 |
|
混勻后，40℃水浴 30min，振蕩 5-6 次，使土樣與反應(yīng)液充分接觸
試劑二（μ L） | 50 | 50 |
土壤中性蛋白酶（S-NPT）檢測試劑盒混勻，8000g 25℃離心 10min，取上清液，在 EP 管或 96 孔板中加入下列試劑
| 測定管 | 對照管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 |
上清液（μ L） | 30 | 30 |
|
試劑六（μ L） |
|
| 30 |
試劑四（μ L） | 140 | 140 | 140 |
試劑五（μ L） | 30 | 30 | 30 |
混勻，40℃水浴 20min，680nm 下讀取各管吸光值A(chǔ)
注意：標(biāo)準(zhǔn)管只需測一次。每個測定管設(shè)一個對照管。
S-NPT 活性計算：
單位定義：每天每g 土樣中產(chǎn)生 1mg 酪氨酸為一個 S-NPT 活力單位。
S-NPT(mg/d/g)=C 標(biāo)準(zhǔn)×(A 測定管-A 對照管)÷A 標(biāo)準(zhǔn)管×V 反總÷W÷T=48×(A 測定管-A 對照管)÷A 標(biāo)準(zhǔn)管
土壤中性蛋白酶（S-NPT）檢測試劑盒C 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.05mg/mL；V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.2mL；T：反應(yīng)時間，30min=1/48d； W：樣本質(zhì)量，0.01g。
