土壤脲酶（UE）檢測試劑盒-可見分光光度法
注意：正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
產品內容：
提取液：液體30mL×1瓶，4℃保存；
試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存，臨用前加6mL蒸餾水充分溶解；
試劑二：液體25mL×1瓶，4℃避光保存；
試劑三 A 液：液體 1mL×1 支，4℃保存；
試劑三 B 液：液體 4mL×1 瓶，4℃保存；臨用前將 A 液倒入 B 液中混合，待用； 試劑四：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；
標準品：液體 1mL×1 支，4℃保存。1mg/mL 氮標準液。
產品說明：
脲酶（UE）廣泛分布于植物的種子中，也存在于動物的血液和尿液中，某些微生物也能分泌脲
酶。UE能夠水解尿素產生氨和碳酸，對尿素轉化起關鍵作用。利用靛酚藍比色法測定脲酶水解尿素產生的NH3-N來反應UE活性。
土壤脲酶（UE）檢測試劑盒-可見分光光度法自備實驗用品及儀器：
可見分光光度計、天平、研缽/勻漿器、低溫離心機、1ml玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。操作步驟：
一、樣品處理
1.組織：按照質量（g）：提取液體積(mL)為 1：5-10 的比例（建議稱取約0.1g，加入1mL提取液），冰上勻漿后于4℃，12000g 離心15min，取上清待測。
2.細胞/細菌：按照細胞/細菌數量（104個）：提取液體積（mL）為500-1000：1 的比例（建議500 萬個細胞加入1mL 提取液），冰浴超聲波破碎（功率300w，超聲3 s，間隔7 s，總時間3min）； 然后4℃，12000g 離心15min，取上清置于冰上待測。
3.血清（漿）或其它液體：直接檢測。
二、測定操作：
1、可見分光光度計預熱 30min，波長調至 630nm，蒸餾水調零。
2、將 1mg/mL 氮標準液用蒸餾水稀釋至 2µg/mL 備用。
3、加樣表：
試劑名稱（µL） | 空白管 | 標準管 | 測定管 | 對照管 |
樣品 | - | - | 100 | 100 |
蒸餾水 | - | - | - | 200 |
試劑一 | - | - | 200 | - |
試劑二 | - | - | 400 | 400 |
充分混勻，于 37℃反應 1h， | ||||
反應混合液 | - | - | 400 | 400 |
蒸餾水 | 400 | - | - | - |
標準液 | - | 400 | - | - |
試劑三 | 80 | 80 | 80 | 80 |
試劑四 | 60 | 60 | 60 | 60 |
混勻，室溫靜止 20min。 | ||||
蒸餾水 | 460 | 460 | 460 | 460 |
充分混勻后測定 630nm 處吸光值，記為 A 空白管、A 標準管、A 測定管和 A 對照管。計 算?A 標準=A 標準管-A 空白管，?A 測定=A 測定管-A 對照管。 | ||||
三、計算公式：
1、液體中UE活力的計算：
單位的定義：每mL血清（漿）每分鐘產生1µg NH3-N定義為一個酶活力單位。UE（U/mL）=?A測定÷?A標準×C標準品×V酶促÷V樣÷T
=0.233×?A測定÷?A標準。2、組織、細菌或細胞中UE活力的計算：
1. 按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘產生1µg NH3-N定義為一個酶活力單位。UE活力（U/mg prot）=?A測定÷?A標準×C標準品×V酶促÷(V樣×Cpr)÷T
=0.233×?A測定÷?A標準÷Cpr。
2. 按樣本鮮重計算：
單位的定義：每g組織每分鐘產生1µg NH3-N定義為一個酶活力單位。
UE活力（U/g鮮重）=?A測定÷?A標準×C標準品×V酶促÷(W× V樣÷V提取)÷T
=0.233×?A測定÷?A標準÷W。
3. 按細菌或細胞密度計算：
單位的定義：每1百萬個細菌或細胞每分鐘產生1µg NH3-N定義為一個酶活力單位。UE活力（U /106 cell）=?A測定÷?A標準×C標準品×V酶促÷(細胞數量×V樣÷V提取) ÷T
=0.233×?A測定÷?A標準÷細胞數量。
C標準液：標準液濃度，2 µg/mL；T：反應時間，60min；V酶促：酶促反應體系總體積，0.7mL； V樣：加入反應體系中樣本體積，0.1mL；V提取：提取液體積，1mL；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL； W：樣本質量，g；細胞數量：以百萬計。土壤脲酶（UE）檢測試劑盒-可見分光光度法
