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雙尾RT-qPCR技術(shù)——解決miRNA分離問題

2021年04月07日 16:45武漢艾美捷科技有限公司點(diǎn)擊量：319

雙尾RT-qPCR是什么呢？它是一種基于PCR法的miRNA定量檢測(cè)試劑盒。那么，就先從傳統(tǒng)microRNA PCR檢測(cè)法的痛點(diǎn)說起吧~

 

傳統(tǒng)的PCR法檢測(cè)microRNA，兩個(gè)常規(guī)PCR引物的總長(zhǎng)度幾乎是microRNA長(zhǎng)度的兩倍，因此不適合于做miRNA的引物。以前的技術(shù)通過使用發(fā)夾引物延伸microRNA，添加poly A尾巴或通過連接添加片段來解決這個(gè)問題，但是這會(huì)降低檢測(cè)的靈敏度和特異性。此外，這些方法無法檢測(cè)在3'末端修飾的microRNA，因?yàn)樗鼤?huì)干擾延伸過程。

 

好了，說到這里，在鄭重向大家介紹這款名為雙尾RT-qPCR技術(shù)。它的原理如下：

與使用單個(gè)結(jié)合探針不同，雙尾PCR使用兩個(gè)半探針，它們分別結(jié)合到不同的microRNA丨片段上，這些片段通過折疊的系鏈連接。雖然每個(gè)半探針本身都很短, 無法結(jié)合到microRNA上，但當(dāng)兩個(gè)半探針互補(bǔ)時(shí)，它們會(huì)協(xié)同結(jié)合，這種結(jié)合的特異性是非常高的，因?yàn)樵诙贪胩结樦绣e(cuò)配的影響非常大。然后可以使用兩個(gè)特定序列引物對(duì)形成的cDNA進(jìn)行PCR擴(kuò)增，用SYBR進(jìn)行檢測(cè)。

RT-qPCR.jpg

怎么樣，有沒有明白一點(diǎn)了，那么接下來，了解一下它的優(yōu)勢(shì)吧！

 

1.高靈敏度：zui多少于10個(gè)分子；

2.高特異性

適合于多種樣本（血漿/血清，血液，組織等）中的miRNA檢測(cè)和定量

通過折疊的系鏈連接的兩個(gè)半探針（結(jié)合不同的microRNA丨片段）

動(dòng)態(tài)范圍廣（高達(dá)9 log）

在進(jìn)行單重qPCR之前，可進(jìn)行雙管多重RT-PCR

提供定制化服務(wù)

高靈敏度及特異性：

1）5´互補(bǔ)片段顯著提高分析的靈敏度：

RT-qPCR-1.png

2）5´ 互補(bǔ)片段顯著提高檢測(cè)的特異性：

RT-qPCR-2.jpg

適用樣本類型豐富：

microRNA-3.png

檢測(cè)流程簡(jiǎn)便：

RT-qPCR-4.jpg

 

文章來源：艾美捷科技

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