細(xì)胞名稱  犬腎細(xì)胞-HA；MDCK-HA使用說(shuō)明書
形態(tài)特性   上皮細(xì)胞樣
生長(zhǎng)特性  貼壁生長(zhǎng)
特征特性   該細(xì)胞屬保藏，其特征特性尚未公開(kāi)。 
培養(yǎng)條件   DMEM-H: Dulbecco's Modified Eagle's Medium (DME H-21 4.5g/Liter Glucose)  10%FBS
傳代方法   1:3傳代，3-4天傳1次
傳代情況  C5
凍存條件   基礎(chǔ)培養(yǎng)基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測(cè)  陰性
STR  
同工酶  
染色體  
使用權(quán)限  未定

復(fù)蘇操作要點(diǎn)： 
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預(yù)熱；準(zhǔn)備一個(gè)15mL無(wú)菌的離心管，加入8mL預(yù)熱培養(yǎng)基。 
2）將凍存細(xì)胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復(fù)溫（可準(zhǔn)備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細(xì)胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動(dòng)凍存管，使細(xì)胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細(xì)胞能盡快通過(guò)zui易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒(méi)入水中，BIU-87(人膀胱癌細(xì)胞)避免引起污染。 
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺(tái)內(nèi)，將管內(nèi)細(xì)胞轉(zhuǎn)移至準(zhǔn)備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細(xì)胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時(shí)避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。 
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細(xì)胞懸液。 
5）將細(xì)胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細(xì)胞瓶?jī)?nèi)，補(bǔ)加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動(dòng)細(xì)胞瓶使細(xì)胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。 
6）第二天觀察細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細(xì)胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細(xì)胞長(zhǎng)至80~90%匯合時(shí)正常傳代。一般剛復(fù)蘇的細(xì)胞需經(jīng)過(guò)2~3次傳代，細(xì)胞活力恢復(fù)后才能進(jìn)行后續(xù)的實(shí)驗(yàn)。
操作步驟：
1. 將無(wú)菌的蓋玻片置于細(xì)胞培養(yǎng)皿中，將細(xì)胞懸液接種于培養(yǎng)皿中進(jìn)行細(xì)胞爬片，待細(xì)胞長(zhǎng)至80%時(shí)取出爬片。
2. 用PBS浸洗爬片3次，4%的多聚甲醛固定爬片15min，再次用PBS浸洗玻片3次，每次3min。
3. 0.5% Triton X-100（PBS配制）室溫孵育爬片20min，使細(xì)胞通透。
4. 3% H2O2滴加爬片上以阻斷內(nèi)源性過(guò)氧化物酶，室溫孵育15min（一般用甲醇或蒸餾水稀釋30%過(guò)氧化氫），PBS沖洗3次，每次3min。
5. 封閉血清室溫孵育20min，PBS沖洗3次，每次3min。
6. 細(xì)胞特異性一抗孵育：按照抗體說(shuō)明書稀釋比例稀釋好一抗，滴加在爬片上，于4°C濕盒中孵育一夜，PBS沖洗3次，每次3min。
7. 二抗孵育：選與一抗對(duì)應(yīng)的二抗，按比例稀釋后滴加在爬片上，37°C濕盒中孵育30min，PBS沖洗3次，每次3min。
8. 將爬片周圍水漬吸干，爬片上滴加新鮮配制的DAB顯色液，顯微鏡下觀察，當(dāng)出現(xiàn)棕黃色或棕褐色的陽(yáng)性信號(hào)時(shí)用蒸餾水沖洗終止顯色。
9. 復(fù)染：用Harris蘇木素復(fù)染30s~1min，水洗后用1%的鹽酸酒精分化，再用蒸餾水（或PBS）水洗返藍(lán)。
10. 封片：將中性樹(shù)膠滴在爬片一側(cè)，再用蓋玻片蓋上，先放平蓋玻片一側(cè)再輕輕放下另一側(cè)，以免產(chǎn)生氣泡，封好的爬片平放置于通風(fēng)廚中晾干。
11. 鏡檢觀察。
【溫馨提示】細(xì)胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
人ES1蛋白同系物，線粒體(C21orf33/HES1/KNPI)免疫試劑盒    Human C21orf33 ELISA kit
人EB病毒核抗原1(EBNA1)抗體(IgG)免疫試劑盒    Human EBNA1 IgG ELISA kit
人EB病毒IgA(EBv IgA)免疫試劑盒    Human epstein-barr virus(EBv)antibody(IgA)ELISA Kit
人EB病毒(Ebv)抗體(IgM)免疫試劑盒    Human epstein-barr virus(Ebv)antibody(IgM)ELISA Kit
人EB病毒(EBv)抗體(IgG)免疫試劑盒    Human epstein-barr virus(EBv)antibody(IgG)ELISA Kit
人E3泛素蛋白連接酶TRIM68(TRIM68)抗體免疫試劑盒    Human TRIM68 antibody ELISA kit
人E3泛素蛋白連接酶TRIM68(TRIM68)免疫試劑盒    Human TRIM68 ELISA kit三乙二醇二甲醚 99.9％    NA    
三乙二醇    Triethylene glycol monoethyl ether    112-50-5
三乙基硅烷三氟磺酸酯    Triethylsilyl trifluoromethanesulfonate    79271-56-0
三乙基鋁（*）    Triethylaluminum    97-93-8
三乙基氯硅烷    Chlorotriethylsilane    994-30-9
三乙基    Triethylborane    97-94-9
三醋精;三乙酸甘油酯;甘油三乙酸酯    Triacetin;    102-76-1
三乙烯二胺    Triethylenediamine    280-57-9
三乙烯四胺    Triethylenetetramine    112-24-3
三乙酰氧基硼氫化鈉    Sodium triacetoxyborohydride    56553-60-7