細(xì)胞傳代步驟：
如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%，即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。
1. 棄去培養(yǎng)上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。
2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養(yǎng)瓶中，置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況，若細(xì)胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補(bǔ)加培養(yǎng)基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。
4. 將細(xì)胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
細(xì)胞簡介：
小鼠肺泡巨噬分離自肺組織；肺是機(jī)體的呼吸器官，位于胸腔，左右各一，覆蓋于心之上。肺有分葉，左二右三，共五葉。肺經(jīng)肺系(指氣管、支氣管等)與喉、鼻相連，故稱喉為肺之門戶，鼻為肺之外竅。肺泡由單層上皮細(xì)胞構(gòu)成的半球狀囊泡。肺中的支氣管經(jīng)多次反復(fù)分枝成無數(shù)細(xì)支氣管，它們的末端膨大成囊，囊的四周有很多突出的小囊泡，即為肺泡。巨噬細(xì)胞屬免疫細(xì)胞，有多種功能，是研究細(xì)胞吞噬、細(xì)胞免疫和分子免疫學(xué)的重要對象。巨噬細(xì)胞較易獲得，便于培養(yǎng)，并可進(jìn)行純化。巨噬細(xì)胞屬不繁殖細(xì)胞群，在條件適宜下可生活2-3周，多用做原代培養(yǎng)，難以長期生存。巨噬細(xì)胞(Macrophages)是一種位于組織內(nèi)的白血球，源自單核細(xì)胞，而單核細(xì)胞又來源于骨髓中的前體細(xì)胞。巨噬細(xì)胞和單核細(xì)胞皆為吞噬細(xì)胞，在脊椎動物體內(nèi)參與非特異性防衛(wèi)(先天性免疫)和特異性防衛(wèi)(細(xì)胞免疫)。它們的主要功能是以固定細(xì)胞或游離細(xì)胞的形式對細(xì)胞殘片及病原體進(jìn)行噬菌作用(即吞噬以及消化)，并激活淋巴球或其他免疫細(xì)胞，令其對病原體作出反應(yīng)。肺泡巨噬細(xì)胞的吞噬、免疫和分泌作用都十分活躍，有重要防御功能。肺泡是重要的巨噬細(xì)胞儲存器官，為結(jié)核病的研究提供了重要的材料。
方法簡介：
公司實驗室分離的小鼠肺泡巨噬采用機(jī)械研磨結(jié)合差速貼壁法制備而來，細(xì)胞總量約為5×10?cells/瓶。
質(zhì)量檢測：
公司實驗室分離的小鼠肺泡巨噬經(jīng)CD68免疫熒光鑒定，純度可達(dá)90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細(xì)菌、酵母和真菌等。
產(chǎn)品名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 5×105cells/T25細(xì)胞培養(yǎng)瓶 | |
組織來源 | 肺組織 | 產(chǎn)品貨號 | YS-01X7471 |
生長特性 | 貼壁 | 細(xì)胞形態(tài) | 巨噬細(xì)胞樣 |
培養(yǎng)信息：
培養(yǎng)基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細(xì)胞形態(tài) 巨噬細(xì)胞樣
傳代特性 屬于終末分化細(xì)胞；屬于不增殖細(xì)胞群
消化液 （12mM）
培養(yǎng)條件 氣相：空氣，95%；CO2，5%
細(xì)胞復(fù)蘇步驟:
將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜（或?qū)⒓?xì)胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養(yǎng)基，培養(yǎng)過夜）。第二天換液并檢查細(xì)胞密度。
公司正在出售的產(chǎn)品：
大鼠白三烯B4(LTB4)試劑盒 ，英文名： LTB4 ELISA Kit
Mouse ierleukin 12 (IL-12/P40) ELISA Kit 小鼠白介素12(IL-12/P40)試劑盒
ELISA 小鼠胰高血糖素(mouse Glucagon) 進(jìn)口分裝
CLIAKitfori-PTH(MouseiactParathormone)ELISAKit小鼠全段甲狀旁腺素
通用型非蛋白/游離巰基含量比色法定量試劑盒20次
ELISAKitADP大鼠脂聯(lián)素
小鼠白介素23(IL-23)試劑盒 96T/48T
小鼠白介素2(IL-2)試劑盒 96T/48T
小鼠白介素1受體拮抗劑(IL-1Ra)試劑盒 96T/48T
小鼠白介素1可溶性受體Ⅱ(IL-1sRⅡ)試劑盒 96T/48T
1號染色體開放閱讀框144抗體
小鼠肌球蛋白(Myosin)ELISA 試劑盒 96T/48T
Rat granulocyte colony stimulating factor (G-CSF) ELISA Kit 大鼠粒細(xì)胞集落刺激因子(G-CSF)試劑盒
Humanprotocadherin1,PCDH1ELISAKit 人原鈣黏素1(PCDH1)試劑盒 96T/48T 進(jìn)口分裝
Humanai-livercytosolaibodytype1,LC1試劑盒人抗肝細(xì)胞胞質(zhì)1型抗體(LC1)試劑盒規(guī)格：96T/48T
植物內(nèi)質(zhì)網(wǎng)粗提分離試劑盒10次
Humanvanillylmandelicacid,VMAELISAKit人垂草扁桃酸(VMA)試劑盒規(guī)格：96T/48T
磷酸化非受體酪激酶c-Abl抗體
CA8重組小鼠 Carbonic Anhydrase VIII / Car8 蛋白 Protein
CD200受體1(CD200R1)重組蛋白 Recombinant CD200 Receptor 1 (CD200R1)
IP6K1重組人 IHPK1 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽) Protein
EPOR Protein Human 重組人 EPO Receptor / EPOR 蛋白
FCAR Protein Rat 重組大鼠 CD89 / FCAR 蛋白
小鼠肺泡巨噬細(xì)胞脯氨酰羧肽酶(PRCP)重組蛋白 Recombinant Prolylcarboxypeptidase (PRCP)
EPOR Protein Human 重組人 EPO Receptor / EPOR 蛋白
CCL3重組小鼠 CCL3 / Mip1a 蛋白 Protein
SERPINC1 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 SerpinC1 / AntithrombinIII / ATIII 蛋白
CD3D & CD3E重組人 CD3D & CD3E Heterodimer 蛋白 Protein
細(xì)胞凍存步驟:
待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時，可進(jìn)行細(xì)胞凍存。下面T25瓶為例；
1．細(xì)胞凍存時，棄去培養(yǎng)基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml，細(xì)胞變圓脫落后，加入2ml培養(yǎng)基終止消化，可使用血球計數(shù)板計數(shù)。
2．1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮，加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻，按每1ml的數(shù)量分配到凍存管中，注意凍存管做好標(biāo)識。本公司按每個凍存管細(xì)胞數(shù)目大于1X106個細(xì)胞凍存。
3．將凍存管置于程序降溫盒中，放入-80度冰箱，至少2個小時以后轉(zhuǎn)入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取
