熒光素酶轉染人成骨肉瘤細胞特性:該細胞是Fogh J和TrempeG分離和鑒定的眾多人類腫瘤細胞系中的一種;
細胞純度:93%
細胞活力:87%(Viability by Trypan Blue Exclusion)
細胞檢測:細胞不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌
保存及應用
如是新鮮原代細胞,請于收到后放入CO2培養箱內靜置2-3h后再進行實驗操作;如是凍存細胞,收到后可放入液氮或-80℃冰箱保存也可進行復蘇操作。
熒光素酶轉染人成骨肉瘤細胞操作步驟
1用包被Buffer稀釋的重組人TFAR19(1mg/ml)包被ELISA板, 100ml/well, 37°C孵育2h或4°C過夜(一般24h以上)。
2洗滌Buffer洗板三次,加入封閉液,200 ml/well , 37°C孵育2h或4°C過夜。
3洗滌Buffer洗板三次,加入不同稀釋度的病人血清(3個重復孔)100ml/well ,37°C孵育1h。設包被Buffer、洗滌Buffer 、封閉液為陰性對照。
4洗滌Buffer洗板三次,加入1:2500稀釋的HRP標記的抗人IgG, 100ml/well,37°C孵育1h。
5洗滌Buffer洗板三次,加入顯色液,100 ml/well,避光反應10~15min。
6加入H2SO4終止反應,50 ml/well。
7ELISA Reader 讀取OD490 光密度值,分析和比較病人血清和正常血 清中TFAR19自身抗體的表達水平。
潛伏期特點:
長短與細胞接種密度、種類、使用的培養基性質有關。
(1)細胞貼附后進入潛伏期,細胞無增殖。少見分裂相,細胞有運動活動。
(2)初代培養 細胞潛伏期約為24~96小時或更長,
連續細胞系和腫瘤細胞潛伏期約6~24小時。
(3)細胞接種密度大潛伏期短。
(4)細胞出現分裂相增多時,標志細胞進入指數增生期。
指數增生期(logarithmic growth phase):
特點:細胞增殖zui旺盛階段,分裂相增多。
細胞分裂指數(mitotie index MI) :
表示每1000個細胞中的分裂相數。
條件:分裂相數與細胞種類、培養成分、pH培養箱溫度有關。
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