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人肺腺癌細胞(轉(zhuǎn)染TK基因的GLC-82細胞)GLC-82-TK細胞

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  • 公司名稱上海滬震實業(yè)有限公司
  • 品       牌
  • 型       號
  • 所  在  地上海市
  • 廠商性質(zhì)生產(chǎn)廠家
  • 更新時間2018/1/23 21:06:39
  • 訪問次數(shù)264
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上海滬震實業(yè)有限公司是一家集研發(fā)、生產(chǎn)和銷售于一體的生命科學(xué)實驗室產(chǎn)品創(chuàng)新性高科技企業(yè)。廠房嚴(yán)格按照GMP標(biāo)準(zhǔn)設(shè)計建造,擁有*的生產(chǎn)設(shè)備和檢測儀器。主要從事免疫學(xué)、分子生物學(xué)和常規(guī)生化試劑的研發(fā)、銷售。并代理銷售Omega、Sigma、R&D、GBD、ATCC、HYCLONE等二十多家國外,致力于為廣大高校、科研院所和企事業(yè)單位提供的科研試劑和完善的技術(shù)服務(wù),滿足生物化學(xué)、分子生物學(xué)、細胞生物學(xué)、免疫學(xué) ELISA試劑盒,抗體,標(biāo)準(zhǔn)品,微生物培養(yǎng)基等生物科技實驗需求。
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人肺腺癌細胞(轉(zhuǎn)染TK基因的GLC-82細胞)GLC-82-TK細胞
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人肺腺癌細胞(轉(zhuǎn)染TK基因的GLC-82細胞)GLC-82-TK細胞 產(chǎn)品信息

人肺腺癌細胞(轉(zhuǎn)染TK基因的GLC-82細胞)GLC-82-TK細胞基本特性

細胞生長:貼壁生長

細胞形態(tài):上皮樣;多角形 

細胞數(shù)量:1×106個細胞數(shù)

細胞傳代:1:2傳代

人肺腺癌細胞(轉(zhuǎn)染TK基因的GLC-82細胞)GLC-82-TK細胞的原位染色

(1)貼壁生長的對數(shù)期細胞鋪在24孔或6孔板中(內(nèi)有潔凈蓋玻片),讓其爬片生長,待長到50%~80%滿時,凋亡誘導(dǎo)劑處理細胞。

(2)將不同時間點處理的細胞進行免疫熒光染色,染色步驟同上。

(3)將染色的爬片細胞放于一張滴有少量甘油(5ml)的載玻片上,熒光顯微鏡或共聚焦激光掃描顯微鏡觀察TFAR19在細胞中的定位。

臨床病理切片的染色、檢測。

原代細胞的培養(yǎng)、檢測。

分析TFAR19蛋白在人體內(nèi)各組織器官的分布及定位

透射電子顯微鏡觀察

  結(jié)果評判:凋亡細胞體積變小,細胞質(zhì)濃縮。凋亡Ⅰ期(pro-apoptosis nuclei)的細胞核內(nèi)染色質(zhì)高度盤繞,出現(xiàn)許多稱為氣穴現(xiàn)象(cavitations)的空泡結(jié)構(gòu);Ⅱa期細胞核的染色質(zhì)高度凝聚、邊緣化;細胞凋亡的晚期,細胞核裂解為碎塊,產(chǎn)生凋亡小體。

DNA片斷化檢測

  細胞凋亡時主要的生化特征是其染色質(zhì)發(fā)生濃縮, 染色質(zhì)DNA在核小體單位之間的連接處斷裂, 形成50~300kbp長的DNA大片段, 180~200bp整數(shù)倍的寡核苷酸片段, 在凝膠電泳上表現(xiàn)為梯形電泳圖譜(DNA ladder)。人肺腺癌細胞(轉(zhuǎn)染TK基因的GLC-82細胞)GLC-82-TK細胞經(jīng)處理后,采用常規(guī)方法分離提純DNA,進行瓊脂糖凝膠和溴化乙啶染色,在凋亡細胞群中可觀察到典型的DNA ladder。如果細胞量很少,還可在分離提純DNA后,用32P-ATP和脫氧核糖核苷酸末端轉(zhuǎn)移酶(TdT)使DNA標(biāo)記,然后進行電泳和放射自顯影,觀察凋亡細胞中DNA ladder的形成。

大分子染色體DNA片段的測定

細胞凋亡的早期,染色體斷裂成為50~300kbp長的DNA大片段。所有超過一定分子量大小的雙鏈DNA分子在瓊脂糖凝膠中的遷移速度相同。線性DNA的雙螺旋半徑超過凝膠半徑時,即達到分辨力的極限。此時凝膠不再按分子量的大小來篩分DNA,DNA像通過彎管一樣,以其一端指向電場一極而通過凝膠,這種遷移模式稱之為"爬行"。因此,細胞凋亡早期產(chǎn)生的50~300kbp長的DNA大片段不能用普通的瓊脂糖凝膠電泳來分離。通常采用脈沖電泳技術(shù)可圓滿地解決這一問題。這個方法是在凝膠上外加正交的交變脈沖電場。每當(dāng)電場方向改變后,大的DNA分子便滯流在爬行管中,直至新的電場軸向重新定向后,才能繼續(xù)向前移動。DNA分子量越大,這種重排所需要的時間就越長。當(dāng)DNA分子變換方向的時間小于電脈沖周期時,DNA就可以按其分子量大小分開。

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