細胞傳代步驟:
如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養。
1. 棄去培養上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2. 加2ml消化液(0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)于培養瓶中,置于37℃培養箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3. 按6-8ml/瓶補加培養基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養液后吹勻。
4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
細胞簡介:
小鼠子宮成纖維分離自子宮組織;子宮是孕育胎兒的器官,位于盆腔中部,膀胱與直腸之間,其位置可隨膀胱與直腸的充盈程度或體位而有變化。子宮的正常位置主要依靠子宮諸韌帶、盆膈、尿生殖膈及會陰中心腱等結構維持,這些結構受損或松弛時,可以引起子宮脫垂。成纖維細胞(Fibroblast)是疏松結締組織的主要細胞成分,由胚胎時期的間充質細胞分化而來;成纖維細胞較大,輪廓清楚,多為突起的紡錘形或星形的扁平狀結構,其細胞核呈規則的卵圓形,核仁大而明顯。成纖維細胞功能活動旺盛,細胞質嗜弱堿性,具明顯的蛋白質合成和分泌活動,在一定條件下,它可以實現跟纖維細胞的互相轉化;成纖維細胞對不同程度的細胞變性、壞死和組織缺損的修復有著十分重要的作用。剛分離的子宮成纖維細胞呈圓形、折光性良好,懸浮于培養基中。30min細胞貼壁,其中部分開始伸出偽足,表現為小的突起;6h后細胞基本貼壁,伸展成梭形,胞核清晰,分布較均勻,散在生長,不聚集成團;細胞生長迅速,5-7天即呈融合狀態,細胞排列緊密,有的交叉重疊生長,平坦、胞體較大,細胞質透明,細胞核較大,呈橢圓形,顏色淡。細胞融合,并彼此連接成網狀;細胞呈突起的紡錘形或星形的扁平分布。子宮成纖維細胞的主要特征:①是子宮的重要細胞組成,在體外易于培養;②在子宮損傷后能修復和重塑子宮;③在子宮炎癥時能有效控制炎癥擴散。
方法簡介:
公司實驗室分離的小鼠子宮成纖維采用-膠原酶混合消化法結合差速貼壁法制備而來,細胞總量約為5×10?cells/瓶。
質量檢測:
公司實驗室分離的小鼠子宮成纖維經Vimentin免疫熒光鑒定,純度可達90%以上,且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
產品名稱 | 產品規格 | 5×105cells/T25細胞培養瓶 | |
組織來源 | 子宮組織 | 產品貨號 | YS-01X7214 |
生長特性 | 貼壁 | 細胞形態 | 成纖維細胞樣 |
培養信息:
培養基 含FBS、生長添加劑、Penicillin、Streptomycin等
換液頻率 每2-3天換液一次
生長特性 貼壁
細胞形態 成纖維細胞樣
傳代特性 可傳3代左右
消化液 0.25%
培養條件 氣相:空氣,95%;CO2,5%
細胞復蘇步驟:
將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入約8ml培養基,培養過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。
公司正在出售的產品:
大鼠補體蛋白3(C3)試劑盒 ,英文名: C3 ELISA Kit
Mouse alpha 1 microglobulin (alpha 1-MG) ELISA Kit 小鼠α1微球蛋白(α1-MG)試劑盒
ELISA 小鼠噬酸性粒細胞趨化因子(mouse Eotaxin) 進口分裝
CLIAKitforKLR(Humankillercelllectin-likereceptor)ELISAKit人殺傷細胞凝集素樣受體
通用型半胱(cysteine)含量高效液相色譜法定量試劑盒20次
ELISAKitTPA大鼠組織多肽抗原
兔補體蛋白3試劑盒 兔補體蛋白3試劑盒 規格型號:96T/48T 兔補體蛋白3試劑盒,規格型號:96T/48T,來源:試劑盒(進口分裝),產品別名:兔補體蛋白3試劑盒、兔補體蛋白3 試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質期:6個月。
兔半胱酸蛋白酶抑制劑試劑盒 兔半胱酸蛋白酶抑制劑試劑盒 規格型號:96T/48T 兔半胱酸蛋白酶抑制劑試劑盒,規格型號:96T/48T,來源:試劑盒(進口分裝),產品別名:兔半胱酸蛋白酶抑制劑試劑盒、兔半胱酸蛋白酶抑制劑試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質期:6個月。
兔白細胞介素35試劑盒 兔白細胞介素35試劑盒 規格型號:96T/48T 兔白細胞介素35試劑盒,規格型號:96T/48T,來源:試劑盒(進口分裝),產品別名:兔白細胞介素35試劑盒、兔白細胞介素35 試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質期:6個月。
兔白細胞介素1試劑盒 兔白細胞介素1試劑盒 規格型號:96T/48T 兔白細胞介素1試劑盒,規格型號:96T/48T,來源:試劑盒(進口分裝),產品別名:兔白細胞介素1試劑盒、兔白細胞介素1試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質期:6個月。
SC35蛋白抗體
小鼠apelin 12(AP12)ELISA 試劑盒 96T/48T
Rat iercellular adhesion molecule 3 (ICAM-3/CD50) ELISA Kit 大鼠細胞間粘附分子3(ICAM-3/CD50)試劑盒
HumanParathyroidHormone-LikeRelatedProtein,PTHrPELISAKit 人甲狀旁腺激素相關蛋白(PTHrP)試劑盒 96T/48T 進口分裝
Humancomplemeconolprotein,CCP試劑盒人補體調節蛋白(CCP)試劑盒規格:96T/48T
組織B-RAF激酶活性定量試劑盒(A/B/C)20次
Humanpulmonaryactivatioegulatedchemokine,PARCELISAKit人肺部活化調節趨化因子(PARC/CCL18)試劑盒規格:96T/48T
減數分裂重組蛋白家族REC8抗體
CPE重組人 Carboxypeptidase E / CPE 蛋白 (Fc 標簽) Protein
內皮素1(EDN1)重組蛋白 Recombinant Endothelin 1 (EDN1)
CCL18重組人 CCL18 / PARC / MIP4 蛋白 Protein
HYOU1 Protein Human 重組人 ORP150 / HYOU1 / HSP12A 蛋白
NP Protein H7N9 重組甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) Nucleocapsid / NP
小鼠子宮成纖維細胞內皮素1(EDN1)重組蛋白 Recombinant Endothelin 1 (EDN1)
HYOU1 Protein Human 重組人 ORP150 / HYOU1 / HSP12A 蛋白
CPE重組人 Carboxypeptidase E / CPE 蛋白 (Fc 標簽) Protein
NP Protein H7N9 重組甲型流感 H7N9 (A/Anhui/1/2013) Nucleocapsid / NP
CCL18重組人 CCL18 / PARC / MIP4 蛋白 Protein
細胞凍存步驟:
待細胞生長狀態良好時,可進行細胞凍存。下面T25瓶為例;
1.細胞凍存時,棄去培養基后,PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml,細胞變圓脫落后,加入2ml培養基終止消化,可使用血球計數板計數。
2.1000RPM離心5分鐘去掉上清。用血清重懸浮,加DMSO至最終濃度為10%。加入DMSO后迅速混勻,按每1ml的數量分配到凍存管中,注意凍存管做好標識。本公司按每個凍存管細胞數目大于1X106個細胞凍存。
3.將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取