產品屬性：
產品名稱 | 檢測方法 | 規格 | 貨號 |
SBE淀粉分支酶檢測試劑盒可見分光光度法 | 可見分光光度法 | 50管/24樣 | FS-01S63572 |
商品介紹：
測定意義
SBE（EC 2.4.1.18）主要存在于植物中，是參與支鏈淀粉合成的關鍵酶，測定SBE活性在淀粉生物合成、優質農作物品種選育和品質遺傳改良研究中具有重要意義。
測定原理
淀粉和碘結合后在660nm有特征光吸收，SBE可切斷支鏈淀粉側支，從而降低了淀粉-碘復合物在660nm吸收值，一定時間內吸光度下降的百分率可以反映SBE活性。
需自備的的儀器和用品
可見分光光度計、水浴鍋、臺式離心機、可調式移液器、1 mL玻璃比色皿、研缽、冰、蒸餾水
產品內容：
公司產品僅用于科研酸性提取液：25mL×1 瓶，4℃保存；
堿性提取液：25mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 1.5mL×1 支，4℃保存
試劑三：粉劑×1 支，-20℃保存，用時加入 1.6mL 雙蒸水，混勻，4℃保存一周；
試劑四：粉劑×1 支，4 ℃保存，用時加入 1.9mL 雙蒸水，混勻，4℃保存一周；
試劑五：液體 0.7mL×1 支，4 ℃保存；
試劑六：液體 10mL×1 瓶，4 ℃保存；
試劑七：自備。19.2mL 乙醇和 0.8mL 蒸餾水充分混合備用。
NAD 標準品：粉劑×1 支，-20℃保存。臨用前加入 1.5mL 蒸餾水，即 2umol/mL，將其稀釋為 1.25nmol/mL 的 NAD 標準溶液備用。
NADH 標準品：粉劑×1 支，-20℃保存。臨用前加入 1.4mL 蒸餾水，即 2umol/mL，將其稀釋為 1.25nmol/mL 的 NADH 標準溶液備用。
操作步驟：
一、NAD+和 NADH 的提?。?/span>
1、血清（漿）中 NAD+和 NADH 的提?。?/span>
NAD+的提?。喝?0.1mL 血清（漿），加入 0.5mL 酸性提取液，煮沸 5min (蓋緊，以防止水分 散失)，冰浴冷卻后，10000g 4℃離心 10min；取上清 200uL，加入等體積堿性提取液；混勻，10000g 4℃離心 10min，取上清，冰上保存待測。
NADH 的提取：取 0.1mL 血清（漿），加入 0.5mL 堿性提取液，煮沸 5min(蓋緊，以防止水分 散失)，冰浴冷卻后，10000g 4℃離心 10min，取上清 200uL，加入等體積酸性提取液；混勻，10000g 4℃離心 10min，取上清,冰上保存待測。
2、組織中 NAD+和 NADH 的提?。?/span>
NAD+的提取：稱取約 0.1g 組織，加入 0.5mL 酸性提取液，冰浴研磨，煮沸 5min(蓋緊，以防 止水分散失)，冰浴冷卻后，10000g 4℃離心 10min，取上清 200uL，加入等體積堿性提取液混勻， 10000g 4℃離心 10min，取上清,冰上保存待測。
NADH 的提?。悍Q取約 0.1g 組織，加入 0.5mL 堿性提取液，冰浴研磨，煮沸 5min(蓋緊，以防 止水分散失)，冰浴冷卻后，10000g 4℃離心 10min，取上清 200uL，加入等體積酸性提取液混勻， 10000g 4℃離心 10min，取上清,冰上保存待測。
3、細胞或細菌中 NAD+和 NADH 的提?。?/span>
NAD+的提?。菏占?500 萬細胞或細菌，加入 0.5mL 酸性提取液，超聲波破碎 1min（強度 20％ 或 200W，超聲 2s，停 1s），煮沸 5min(蓋緊，以防止水分散失)，冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心 10min，取上清液 200uL 另一新的離心管中，加入等體積的堿性提取液使之中和，混勻，10000g 4℃ 離心 10min，取上清,冰上保存待測。
NADH 的提?。菏占?500 萬細胞或細菌，加入 0.5mL 堿性提取液，超聲波破碎 1min（強度 20％ 或 200W，超聲 2s，停 1s），煮沸 5min(蓋緊，以防止水分散失)，冰浴中冷卻后，10000g 4 ℃離心 10min，取上清液 200uL 另一新的離心管中，加入等體積的酸性提取液使之中和，混勻，10000g 4℃ 離心 10min，取上清,冰上保存待測。
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注意事項：
1、操作過程應避光。不可將試劑一、二、三和四混合后再加，必須分開加。
2、反應過程要注意避光。
3、當吸光值大于 1 時，建議稀釋后測量，計算公式中應當乘以稀釋倍數。
