DNase I Solution (RNase & Protease-free)
脫氧核糖核酸酶I溶液（無RNase&蛋白酶）
關鍵詞：
Deoxyribonucleate 5 –Oligonucleotidohydrolase，5′-寡核苷酸-水解酶，Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas，EC No: 3.1.21.1，CAS NO：9003-98-9
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產品名稱 | 產品編號 | 規格 | 儲存 | 價格（元) |
DNase I Solution (RNase & Protease-free) 脫氧核糖核酸酶I溶液（無RNase &蛋白酶） | MF0405-200U | 200U | -20oC | 298 |
MF0405-1000U | 1000U | -20oC | 1348 |
【溫馨提示】：蛋白樣品制備中核酸酶的降解推薦使用全能型的全能核酸酶Benzonase Nuclease，點擊此處了解全能核酸酶的亮點在哪？
產品描述
脫氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，縮寫DNase I，在大多數細胞和組織中都能發現的一種核酸內切酶，偏好切割鄰近嘧啶的磷酸二酯鍵，產生5’端為磷酸基團、3’端為羥基的多聚核苷酸，平均消化產物最小為多聚四核苷酸。Mg2+存在條件下，DNase I可隨機識別和切斷DNA任一條鏈上的任意位點；而在Mn2+存在條件下，DNase I識別DNA的兩條鏈并在幾乎相同的位點進行切割。DNase I可水解多種形式DNA，如單鏈DNA、雙鏈DNA，甚至染色質（其切割速率受組蛋白影響）。
脫氧核糖核酸酶I，英文Deoxyribonuclease I，縮寫DNase I，最早從胰腺中分離而來，至今哺乳動物胰腺也是最主要的來源之一。DNase I以兩對二硫鍵結合的多種糖蛋白混合形式存在。最佳的工作范圍是pH 7-8，DNase的活性依賴于Ca2+，并可被二價金屬離子如Co2+，Mn2+，Zn2+等激活。5mM Ca2+可保護酶使其不被水解，而0.1mM Ca2+可使酶失活速率降至原來的1/2。
本品是即用型溶液形式的DNase I，不含RNase和蛋白酶，適用于各種RNA處理。另外還提供實驗所需的反應緩沖液和終止液，節省時間且用起來更方便。
產品應用
◇ 制備不含DNA的RNA樣本；
◇ RT-PCR反應前RNA樣本內基因組DNA等可能存在DNA污染的去除；
◇ T7，T3，SP6等RNA聚合酶催化的體外RNA轉錄后DNA模板的去除；
◇ DNase I足跡法（DNase I footprinting）研究DNA-蛋白質相互作用；
◇ 缺口平移法標記探針用；
◇ 制備隨機DNA片段文庫；
◇ TUNEL細胞凋亡檢測中用于剪切DNA制備陽性對照；
產品包裝
組分編號 | 組分名稱 | 貨號（規格） | |
MF0405-200U | MF0405-1000U | ||
MF0405-A | DNase I Solution (RNase & Protease-free) | 200U | 1000U |
MF0405-B | 10×Reaction Buffer | 200μl | 1ml |
MF0405-C | 10×Stop Solution | 200μl | 1ml |
保存與運輸方法
保存：-20℃凍存，1年穩定。
運輸：冰袋運輸。
注意事項
1） 本DNase I的儲存緩沖液為50mM Tris-acetate(pH 7.5)，10mM CaCl2，50%(v/v) glycerol。如需對其進行稀釋，則使用本儲存緩沖液進行稀釋。
2） 酶的使用過程中需放在冰盒或冰浴內，使用結束立即放回-20℃保存。
3） 為了您的安全和健康，請穿實驗服并戴一次性手套操作。
使用方法
一、RT-PCR反應前RNA樣本內DNA污染的去除
1.1 DNA模板經核酸內切酶線性化，用酚/氯仿和氯仿/異丙醇提取DNA，用乙醇沉淀后，溶于適量無菌去離子水中。
1.2 往一個RNase-free EP管內依次加入下列試劑：
RNA樣本 | 1μg |
10×Reaction Buffer | 1μl |
用DEPC-treated Water補充 | 至9μl |
DNase I (1U/μl) | 1μl |
【注意】：如果需要處理較大量的RNA樣品，可按比例放大上述反應體系。條件許可下最好往體系內加入適量RNase抑制劑（貨號：MF0218-2KU）以防止RNA降解。
1.3 37℃孵育30min。
1.4 往上述體系內加入1μl 10× Stop Solution使其終濃度為1×，混勻。之后65℃孵育10min使DNase I失活。【注意】：一定要先加入10× Stop Solution，然后再加熱失活RNase I，否則先加熱可能引起RNA被降解。
1.5 加熱處理后的RNA樣品即可直接用作RT-PCR反應用的模板。
二、體外RNA反轉錄后模板DNA的去除
2.1 每個含有0.5μg模板DNA的反轉錄體系中加入1U DNase I，某些情況下模板DNA完quan消化所需的DNase I需通過實驗來摸索。
2.2 37℃孵育15min。
2.3 酚/氯仿抽提失活DNase I。
三、其他用途請參考上述方法或參考文獻等進行。
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貨號 | 名稱 | 規格 |
MF0402-10MG | Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥500 units/mg protein | 10MG |
MF0401-15KU | Deoxyribonuclease I (DNase I) from Bovine Pancreas, ≥2,000 units/mg protein | 15KU |
MF0405-200U | DNase I Solution (RNase & Protease-free) 脫氧核糖核酸酶I溶液 | 200U |
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MF0201-100MG | Proteinase K, Molecular Biology Grade蛋白酶K | 100mg |
MF0218-2KU | RNase Inhibitor (40U/µl), Murine小鼠RNA酶抑制劑 | 2KU |
MF0404-500ML | DEPC-treated Water (DNase、RNase free) DEPC水（無DNase、RNase ) | 500ml |
— —Written/Edited by V. Shallan【版權歸MKBio懋康所有】
上海懋康生物科技有限公司是一家涉足于生命科學和生物技術領域研究的試劑、儀器和實驗室消耗品與實驗服務工作，主要從事細胞生物學、植物學、分子生物學、免疫學、生物化學、蛋白組學。生物制藥與診斷試劑研發生產等領域。 本公司秉承“以人為本，以誠為信、合同守信”的經營理念。堅持"品質保障"的原則為廣大客戶提供優質產品。
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