細胞培養(yǎng)操作規(guī)程;
一.大鼠晶狀體組織提取物說明書培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備:
1)準備RPMI-1640培養(yǎng)基(RPMI-1640:GIBCO,貨號21875-091),90%;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%。
2)培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37℃,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。
3)凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配,液氮儲存。
二.細胞處理:
1)復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管迅速放入37℃水浴中(水面要低于凍存管蓋部)搖晃解凍,移入事先準備好的含有4mL培養(yǎng)基的15ml離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,加入1mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液移入含有5ml培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜。第二天換液并檢查細胞密度。
2)細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。
對于懸浮細胞,傳代可參考以下方法:
方法一:收集細胞,1000RPM,常溫條件下離心5分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻,將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。
以下是大鼠晶狀體組織提取物說明書的訂購信息;?
大鼠晶狀體組織提取物說明書 【Eye: Normal Rat Lens Derivatives】
晶狀體組織位于玻璃體前側(cè)呈雙凸透鏡狀,晶體是眼球屈光系統(tǒng)的重要組成部分,也是具有調(diào)節(jié)能力的屈光間質(zhì)。公司科技提供來自新鮮或冷凍大鼠晶狀體組織中高質(zhì)量的總RNA,PCR準備的*條cDNA鏈,蛋白質(zhì)及其亞組分。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴格的QA/QC流程以確保其質(zhì)量。這些產(chǎn)品可以直接用于基因克隆,表達圖譜分析以及各種分子生物學實驗的研究。
發(fā)貨:客戶可根據(jù)自身科研項目的需要選擇不同類型的細胞培養(yǎng)瓶和相應的細胞密度。公司科技提供的細胞有標準的鑒定流程,保證細胞的純度在90%以上,且不含有 HIV-1、 HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。發(fā)貨的新鮮細胞還包含:1、發(fā)貨的T25方瓶中裝滿50ml左右*培養(yǎng)基;2、說明書及注意事項;3、公司售后服務標準。
保存和應用:客戶可以根據(jù)自己的需求選擇新鮮或者凍存的原代細胞,如是新鮮原代細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入CO2細胞培養(yǎng)箱內(nèi)靜置后2-3h,再進行后續(xù)的實驗操作。如是凍存細胞,客戶收到細胞后應立即將其放入液氮、-80℃冰箱或立即進行復蘇。該細胞只可用于科研,不得用于臨床應用。
細胞培養(yǎng)的優(yōu)點
1大鼠晶狀體組織提取物說明書.研究的對象是活細胞
在實驗過程中,根據(jù)要求可始終保持細胞活力,并可長時間監(jiān)控、檢測甚至定量評估一部分活細胞的情況,包括活細胞的形態(tài)、結(jié)構(gòu)、生命活動等。
2.研究條件可以人為控制
pH、溫度、氧氣、二氧化碳、張力等物理化學的條件,可以根據(jù)實際需要進行人為的控制,同時,可以施加化學、物理、生物等因素作為條件而進行實驗觀察,這些因素同樣可以處于嚴格控制之下。
3.研究的樣本可以達到比較均一性
通過細胞培養(yǎng)一定代數(shù)后,所得到的細胞系則可以達到均一性而屬于同一類型的細胞,需要時,可采用克隆化等方法使細胞達到純化。
4.研究內(nèi)容便于觀察、檢測和記錄
采用各種研究技術(shù):如倒置生物顯微鏡、熒光顯微鏡、電子顯微鏡、流式細胞術(shù)、激光共焦顯微鏡、免疫組織化學、原位雜交、同位素標記等各種儀器設備
記錄方式可采用攝影照片、縮時電影、電視等多種手段。
5.研究的范圍比較廣泛
應用的學科領(lǐng)域較為寬廣,如細胞學、免疫學、腫瘤學、生物化學、遺傳學、分子生物學等;
適用的對象范圍廣,從低等動物到高等動物,一種動物的不同年齡階段以及不同組織,都可進行有針對性的研究。
6.研究的費用相對較經(jīng)濟
可提供大量、同一時期、重復性好的、生物學性狀相似的實驗對象。
注意事項;
1. 大鼠晶狀體組織提取物說明書一般客戶拿到細胞后,應該注意什么?
客戶收到細胞先不開蓋,放在培養(yǎng)箱靜置若干小時后(看細胞密度而定)在倒置顯微鏡下觀察細胞生長情況,并對細胞進行不同倍數(shù)拍照(建議受收細胞時的培養(yǎng)基拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,顯微鏡下拍細胞100X,200X各一張),排除細胞本身污染的情況;收到細胞未開封,出現(xiàn)污染狀況我們負責免費發(fā)送一株細胞。
收到細胞時如無異常情況,請在顯微鏡下觀察細胞密度,如為貼壁細胞,未超過80%匯合度時,將培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)液吸出,留下10ml培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng);超過80%匯合度時,請按細胞培養(yǎng)條件傳代培養(yǎng)。如為懸浮細胞,吸出培養(yǎng)液、1000轉(zhuǎn)/分鐘離心2分鐘,吸出上清,管底細胞用新鮮培養(yǎng)基懸浮細胞后移回培養(yǎng)瓶。
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胰蛋白胨大豆瓊脂表面培養(yǎng)基60mm用于普通表面或醇類與酚類消毒劑的物表 溫特曲霉
雅致放射毛霉=葡匐放射毛霉 腸炎沙門氏菌亞利桑那亞種
德氏乳桿菌乳酸亞種(萊氏曼氏乳桿菌) 大腸埃希菌CMCC44817凍干粉南京便診
威爾氏李斯特菌 乳鏈球菌
嗜熱脂肪芽孢桿菌凍干粉 空腸彎曲桿菌
溶酪葡萄球菌 銀絲菇、絲蓋小包腳菇
敏捷食酸菌 青色鏈霉菌
潔麗香菇豹皮菇 惡臭醋酸桿菌混濁變種
聚多曲霉(薩氏曲霉) 豬霍亂沙門氏菌豬霍亂亞種
木霉 *
磚紅鏈霉菌 平沙綠僵菌
枯草芽孢桿菌凍干粉 玉蕈、真姬菇
師崗鏈霉菌 惡臭假單胞菌
鮑曼不動桿菌 大腸埃希菌CMCC44102凍干粉
羊源細胞
IL1RAPL1 Others Mouse 小鼠 IL-1R8 / IL1RAPL1 人細胞裂解液 (陽性對照)
*(含10mL酶解緩沖液) 1mL
BEL-7404人肝癌細胞 BEL-7404 human hepatocarcinoma cells 1640+10% FBS
IL13 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL13 / ALRH 蛋白
人肺動脈內(nèi)皮細胞(HPAEC) ( 5×105 ) rCSC, 大鼠心肌細胞 Rattus羊源細胞
IL1RAPL1 Others Mouse 小鼠 IL-1R8 / IL1RAPL1 人細胞裂解液 (陽性對照)
*(含10mL酶解緩沖液) 1mL
BEL-7404人肝癌細胞 BEL-7404 human hepatocarcinoma cells 1640+10% FBS
IL13 Protein Cynomolgus 重組食蟹猴 IL13 / ALRH 蛋白
人肺動脈內(nèi)皮細胞(HPAEC) ( 5×105 ) rCSC, 大鼠心肌細胞 Rattus
大鼠晶狀體組織提取物說明書HGF Others Rat 大鼠 HGF / Hepatocyte Growth Factor 人細胞裂解液 (陽性對照)
大鼠嗜堿性粒細胞性白血病細胞;RBL-2H3
肺微血管內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105次方(1ml)
H9細胞,人T淋巴細胞系 小鼠胚胎成纖維細胞,3T3 clone A31細胞 人骨骼肌衛(wèi)星細胞cDNAHSkMSC cDNA
P3X63Ag8.653(小鼠骨髓瘤細胞) 5×106cells/瓶×2
COS-7(非洲綠猴SV40轉(zhuǎn)化的腎細胞) 5×106cells/瓶×2 CL-0182P815(小鼠肥大細胞瘤細胞)5×106cells/瓶×2 正常大鼠腎細胞;NRK