2014年07月02日 07:46上海士鋒生物科技有限公司點擊量：1228
一、原理：蛋白質與福林酚試劑反應，生成深藍色復合物。藍色的深淺與蛋白質含量成正比。可用分光光度計于500nm波長下進行測定。與標準曲線對照，而確定蛋白質含量。
二、試劑與材料
標準酪蛋白溶液(250ug/ml)：酪蛋白預先用微量凱氏定氮法測定純度，再稱量制備。也可用250ug/ml牛血清蛋白質標準溶液。
福林酚試劑：吸取試劑A(0.2M氫氧化鈉與4%無水碳酸鈉溶液等體積混合)100ml，加入試劑B(2%酒石酸鉀鈉溶液與1%五水硫酸銅等體積混合)2ml混合而成。
福林酚試劑乙：吸取5ml苯酚試劑加入5ml蒸餾水稀釋而成。
分光光度計、恒溫水浴槽、蛋白質樣品
三、操作方法
1、標準曲線的制作：分別吸取0，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0ml標準溶液于小試管中，分別加進不同量的蒸餾水，補足到1ml。各加入5ml試劑甲，混勻后于室溫下(25℃左右)放置10min。再加入0.5ml試劑乙，立即混勻，于室溫下反應30min。于500nm波長下測定光密度。以吸光值作為縱坐標，蛋白質含量為橫坐標繪制標準曲線。
2、樣品蛋白質含量的測定
取1ml樣品溶液，加入5ml試劑甲，混勻，于25℃左右放置10min。再加入0.5ml試劑乙，立即搖勻，于25℃左右反應30min，測定吸光值，從標準曲線查出樣品蛋白質含量。
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