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PEI實驗使用注意事項

2020年03月03日 11:29上海撫生實業(yè)有限公司點擊量:878

PEI實驗使用注意事項

質粒質量:請務必使用高質量轉染級無內毒素質粒。通過260 nm光吸收測定DNA 濃度,260nm / 280nm比值確定 DNA 純度(比值應該在1.8~2.0的范圍之內)。如有可能,請通過瓊脂糖凝膠電泳檢測質粒的完整性。

細胞條件:使用適當保存和經常傳代的健康細胞。確保培養(yǎng)基沒有被細菌、真菌或支原體污染。如果細胞是近期復蘇的液氮凍存細胞,請在轉染前至少傳代兩次。建議使用GIBCO或者李記生物的胎牛血清培養(yǎng)細胞。

特別提醒

1. 對于某些類型的細胞如 HEK-293、HEK293T、NIH/3T3 和 COS 細胞,在轉染前兩天鋪板可顯著提高轉入基因的表達水平。如果選擇轉染前兩天鋪板,可適當降低鋪板密度,以確保轉染時細胞的匯合度仍為70~80%。

2. 對于接觸抑制敏感的細胞,可適當降低鋪板密度。

3. 即使在有蛋白(如10%的血清)存在的情況下,DNA-PEI復合物仍能轉染細胞,但是DNA-PEI復合物必須在無蛋白存在的條件下形成。

4. PEI對大多數細胞來而言,每 1μg DNA 使用 3.0 μL EZ Trans試劑都能獲得較高轉染效率。使用者也可嘗試每 1 μg DNA使用 1~4μL體積線性PEI轉染試劑進行優(yōu)化。

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