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2020年01月03日 11:45上海撫生實業(yè)有限公司點擊量:522
*酶聯(lián)免疫試劑盒檢測步驟
準備:將要使用的酶標板條插入酶標板架上,并記錄各標準品和樣品的位置,為減小檢測值波動建議做雙孔平行實驗(每個樣本/標準品點兩孔),未使用的酶標板條用自封袋密封后,保存于2-8℃環(huán)境中以防變質(zhì);
加樣:向?qū)?yīng)微孔中加入標準品工作液/樣品溶液50 μL,向每孔中加入50 μL酶標二抗工作液;再向每孔中加入50 μL抗體工作液;
孵育:輕輕振蕩酶標板10 s,使孔內(nèi)液體充分混勻后,蓋好蓋板膜于25℃避光反應(yīng)20 min;洗滌:取出酶標板后小心揭開蓋板膜,倒出板孔中液體后,在每孔加 250 μL洗滌工作液,浸泡15-30s后倒掉洗滌工作液,然后再加入洗滌工作液重復(fù)洗滌3~4次后,將酶標板倒置于吸水紙上,用力拍干;
顯色:在每孔中加入100 μL 底物A和底物B的混合液(注:底物A液、底物B液必須按體積1:1充分混合,混合液在10 min內(nèi)使用,切不可使用金屬容器盛裝、攪拌試劑以免底物變質(zhì)失效);
終止:在反應(yīng)后的微孔中加入終止液50μL/孔,底物液由藍變黃表明終止成功。
讀數(shù):終止后的酶標板應(yīng)在5 min內(nèi)用酶標儀讀數(shù),建議使用450 nm、630 nm雙波長讀取酶標板吸光度值。
*酶聯(lián)免疫試劑盒利用*抗體與*可產(chǎn)生特異性結(jié)合的性質(zhì),先在酶標板上預(yù)包被抗原,再加入標準品(樣本)和*抗體,樣本或標準品中的*藥物與固定在酶標板上的抗原競爭*抗體,加入底物催化顯色。此時顯色深度與標準品(樣本)中*藥物的含量成反比。
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