單克隆抗體制備---單克隆抗體的大量生產(chǎn)及鑒定

2016年12月29日 08:37上海科興商貿(mào)有限公司點擊量：474

大量生產(chǎn)單克隆抗體的主要方法：

（1）體外使用旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)管大量培養(yǎng)雜交瘤細胞，從一清液中獲取單克隆抗體。但此方法產(chǎn)量低，一般培養(yǎng)液內(nèi)抗體含量為10～60μg/ml,如果大量生產(chǎn)，費用較高。

（2）體內(nèi)接種雜交瘤細胞，制備腹水或血清。

2.單克隆抗體的鑒定

對制備的McAb進行系統(tǒng)的鑒定主要包括以下幾個方面：

（1）抗體特異性的鑒定

除用免疫原（抗原）進行抗體的檢測外，還應該用與其抗原成分相關(guān)的其它抗原進行交叉試驗，方法可用ELISA、IFA法。例如：制備抗黑色素瘤細胞的McAb，除用黑色素瘤細胞反應外，還應該用其它臟器的腫瘤細胞和正常細胞進行交叉反應，以便挑選腫瘤特異性或腫瘤相關(guān)抗原的單克隆抗體

（2）McAb的Ig類與亞類的鑒定

一般在用酶標或熒光素標記的第二抗體進行篩選時已經(jīng)基本上確定了抗體的Ig類型。如果用的是酶標或熒光素標記的兔抗鼠IgG或IgM，則檢測出來的抗體一般是IgG類或IgM類。至于亞類則需要用標準抗亞類血清系統(tǒng)作雙擴或夾心ELISA來確定。在作雙擴試驗時，如加入適量的PEG（3%），更有利于沉淀線的形成。

（3）McAb中和活性的鑒定

用動物或細胞的保護實驗來確定McAb的生物學活性。例如，如果確定抗病毒McAb的中和活性，則可用抗體和病毒同時接種于易感的動物或敏感的細胞，來觀察動物或細胞是否得到抗體的保護。

（4）McAb識別抗原表位的鑒定

用競爭結(jié)合試驗，測相加指數(shù)的方法測定McAb所識別抗原位點，來確定McAb的識別的表位是否相同。

（5）McAb親合力的鑒定

用ELISA或RIA競爭結(jié)合試驗來確定McAb與相應抗原結(jié)合的親合力。

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