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細胞名稱 雜交瘤細胞;7A6A1
形態特性 淋巴母細胞樣
生長特性 半貼壁生長
特征特性 該細胞屬保藏,其特征特性尚未公開。
培養條件 RPMI 1640 (w/o Hepes) 10%FBS
傳代方法 1:3傳代,3-4天傳1次
傳代情況 C5
凍存條件 基礎培養基+5%DMSO+20%FBS
支原體檢測 陰性
STR
同工酶
染色體
細胞種類
凍存
對培養的細胞進行凍存的方法是將細胞置于含有(DMSO)等冷凍保護劑的*培養基中于液氮中儲存。冷凍保護劑可降低培養基的冰點,并可減緩冷卻速度嗎,大大降低冰晶形成的危險 (冰晶可損傷細胞,導致細胞死亡)。
注:DMSO 可促進有機分子進入組織。操作含DMSO的試劑時,應采用與此類物質安全危害相適應的設備和操作規范,并應按照當地法規處置此類試劑。
細胞凍存指導原則
凍存細胞系以備將來之用時,必須遵守以下原則。與其他細胞培養操作一樣,我們建議您嚴格遵守您所用細胞系附帶的操作說明,以便獲得結果。
1)在高細胞濃度情況下進行培養細胞的凍存,并且細胞傳代次數盡可能少。確保凍存前活細胞百分比至少為90%。請注意凍存條件取決于所用細胞系。
2)細胞應緩慢冷凍,可使用可控制降溫速度的低溫冰箱或者低溫冷凍容器使溫度每分鐘大約降低1°C。
3)必須使用推薦的凍存培養基。凍存培養基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑
4)將冷凍的細胞于 -70°C 以下溫度儲存;溫度高于 -50°C 時,冷凍的細胞將開始變質。
5)必須使用無菌凍存管儲存冷凍的細胞。裝有冷凍細胞的凍存管可浸于液氮或者在液氮上方的氣相空間內保存
6)必須穿戴個人防護設備。
7)所有與細胞接觸的溶液和設備均應為無菌狀態。必須采用正確的無菌技術,并且在層流通風櫥內進行。
凍存培養基
凍存細胞時必須使用推薦的凍存培養基。凍存培養基中應含有 DMSO 或者甘油等冷凍保護劑。還可使用專門配制的*凍存培養基。
1)細胞凍存培養基是一種用于哺乳動物細胞的即用型*凍存培養基,其所含胎牛血清和牛血清比例經過優化,可改善細胞活力以及解凍后的細胞復蘇效果。
2)凍存培養基是一種化學成分確定的、無蛋白、無菌凍存培養基,含10% DMSO,適用于多種干細胞和原代細胞 (黑色素細胞除外) 的凍存。
培養細胞凍存方案
以下實驗方案介紹了培養細胞凍存的一般流程。詳細的實驗方案,必須參閱針對具體細胞的產品說明書。
1.配制凍存培養基,于2°C至8°C下儲存,直至使用。請注意使用何種凍存培養基取決于所用細胞系。
2.凍存貼壁細胞時,利用傳代時所用方法輕柔地使細胞從組織培養容器上脫離下來。用該細胞所需*培養基重新懸浮細胞。
3.采用血球計數器、細胞計數儀按照臺盼藍拒染法或者使用 Countess®自動細胞計數儀測定總細胞數和活細胞百分比。根據所需活細胞密度,計算凍存培養基需要量。
4.以大約100-200×g的離心力將細胞懸液離心5至10分鐘。在無菌條件下小心倒掉上清液,不要攪動細胞沉淀。
注:離心速度和時間取決于細胞種類。
5.用預冷的凍存培養基重新懸浮細胞沉淀,將其調整至該細胞適合的活細胞密度。
6.將細胞懸液分裝到若干凍存管中。分裝時,應不時輕輕混合細胞,使其保持均勻的細胞懸液狀態。
7.使用可控制降溫速度的冷凍裝置冷凍細胞,使溫度每分鐘大約降低 1°C。或者,將裝有細胞的凍存管放入凍存盒中,然后將凍存盒置于-80°C條件下過夜。
111743-200501 正丁醇 對照品 含量測定 1ml
111744-200501 1-羥基-3,4,5-*氧口山酮 對照品 含量測定 20mg
111745-200501 苦玄參苷 IA 對照品 含量測定 20mg
111746-200501 醋酸乙酯 對照品 含量測定 1ml
111747-200501 20(S)-原人參二醇 對照品 含量測定 20mg
111748-200501 20(S)-人參皂苷Rh2 對照品 含量測定 20mg
120901-200504 丁公藤 中藥對照藥材 TLC法鑒別 1.0g
120902-200509 大黃(唐古特大黃) 中藥對照藥材 TLC法鑒別 0.5g
120903-200407 牛蒡子 中藥對照藥材 TLC法鑒別 2.4g
120904-200511 甘草(甘草) 中藥對照藥材 TLC法鑒別 1.0g
120905-200508 白芍 中藥對照藥材 TLC法鑒別 0.5g
120906-200308 血竭(麒麟竭) 中藥對照藥材 TLC法鑒別 0.2g
120907-200408 紅花 中藥對照藥材 TLC法鑒別 0.5g
120908-200512 連翹 中藥對照藥材 TLC法鑒別 1.0g
120909-200508 吳茱萸 中藥對照藥材 TLC法鑒別 0.5g
120911-200408 荊芥 中藥對照藥材 TLC法鑒別 0.8g
120912-200507 益母草 中藥對照藥材 TLC法鑒別 1.0g
120913-200407 黃連(三角葉黃連) 中藥對照藥材 TLC法鑒別 0.5g
120914-200307 紫蘇葉 中藥對照藥材 TLC法鑒別 0.7g
120915-200308 檳榔 中藥對照藥材 TLC法鑒別 1.5g
120916-200407 薄荷 中藥對照藥材 TLC法鑒別 0.5g
120917-200507 人參 中藥對照藥材 TLC法鑒別 1.0g
120918-200507 川芎 中藥對照藥材 TLC法鑒別 1.0g
BR
250克 M63 Broth M63肉湯 BR
10升 F-12 Nutrient Mixture F-12營養混合物 含L-谷氨酰胺,不含NaHCO3
500毫升 不含谷氨酰胺
500毫升 含谷氨酰胺
10升 F-12(DMEM) DMEM/F12培養基 BR
10升 M199 Medium M199培養基 細胞培養用
10升 RPMI 1640 1640培養基 含L-谷氨酰胺,不含碳酸氫鈉
10升 無酚紅,含L-谷氨酰胺
500毫升 無血清,含雙抗
500毫升 Hanks’ Balanced Salt solution Hanks’平衡鹽 細胞培養級
500毫升×6支
10升 IMDM IMDM培養基 BR
250克 GAUZEˊs Medium 高氏合成一號瓊脂培養基 放線菌培養
300克 XM-G Agar XM-G瓊脂培養基
20支 半固體瓊脂發酵管 半固體瓊脂發酵管 BR
20支 衛矛醇半固體發酵管 衛矛醇半固體發酵管 BR
20支 V-P半固體瓊脂發酵管 V-P半固體瓊脂發酵管 BR
雜交瘤細胞;7A6A120支 3% NaC1V-P半固體發酵管 3% NaC1V-P半固體發酵管 BR
20支 Korser氏肉湯發酵管 Korser氏肉湯發酵管 BR
20支 丙二酸鹽發酵管 丙二酸鹽發酵管 BR
20支 西蒙氏枸櫞酸鹽發酵管 西蒙氏枸櫞酸鹽
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