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1．無(wú)菌環(huán)境

無(wú)毒和無(wú)菌是體外培養(yǎng)細(xì)胞系的首要條件。細(xì)胞系在活體內(nèi)，解毒系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)可抵抗微生物或其他有害物質(zhì)的入侵，但細(xì)胞系在體外培養(yǎng)的過(guò)程中，缺乏機(jī)體免疫系統(tǒng)的保護(hù)而喪失對(duì)微生物的防御能力和對(duì)有害物質(zhì)的解毒能力。為保證細(xì)胞系能在體外環(huán)境中生長(zhǎng)繁殖，必須要確保無(wú)菌工作區(qū)域、良好的個(gè)人衛(wèi)生、無(wú)菌試劑和培養(yǎng)基以及無(wú)菌操作。

常見(jiàn)的微生物污染有支原體、細(xì)菌、真菌。支原體無(wú)致死毒性，可與細(xì)胞系長(zhǎng)期共存，對(duì)細(xì)胞系有潛在影響，但體積小，不易鑒別，可借助于地衣紅或Hoechst33342染色來(lái)進(jìn)行檢測(cè)。細(xì)菌增殖快，在短時(shí)間內(nèi)即可大量擴(kuò)增，并產(chǎn)生毒素殺死細(xì)胞系。真菌的種類繁多，肉眼可見(jiàn)，漂浮于培養(yǎng)液面上，可呈絲狀、管狀或樹(shù)枝狀等。

2. 合適的溫度

一般哺乳類與禽類細(xì)胞系在體外培養(yǎng)的適宜溫度是37～38℃，不適宜的環(huán)境溫度會(huì)影響細(xì)胞系的生長(zhǎng)。細(xì)胞系對(duì)低溫的耐受能力要強(qiáng)于對(duì)高溫的耐受能力，在低溫下，細(xì)胞系的代謝活力及核分裂能力降低。若溫度不低于0℃，雖然細(xì)胞系代謝受到影響，但無(wú)損傷作用；25～35℃時(shí)，細(xì)胞系以緩慢的速度生長(zhǎng)；但若被置于40℃數(shù)小時(shí)，則不僅不利于細(xì)胞系生存、生長(zhǎng)，甚至可導(dǎo)致其死亡。

3．氣體環(huán)境與pH

細(xì)胞系的體外培養(yǎng)需要理想的氣體環(huán)境，氧氣、二氧化碳是細(xì)胞系生存的必要條件。氧氣參與細(xì)胞系的三羧酸循環(huán)，為細(xì)胞系生存、代謝與合成提供能量；二氧化碳既是細(xì)胞系的代謝產(chǎn)物，是細(xì)胞系生長(zhǎng)的必需成分，又與維持培養(yǎng)液的pH有關(guān)。大多數(shù)細(xì)胞系適宜的pH范圍往往是7.2～7.4。在開(kāi)放式培養(yǎng)中，以5%的二氧化碳?xì)怏w比例為宜。

4. 適宜的滲透壓

高滲溶液或低滲溶液會(huì)引起細(xì)胞系發(fā)生褶皺、腫脹、破裂。因此，滲透壓是體外培養(yǎng)細(xì)胞系的重要條件之一。多數(shù)體外培養(yǎng)的細(xì)胞系對(duì)滲透壓都有一定的耐受能力，實(shí)際應(yīng)用中，260～320mmol/L的滲透壓可適用于大多數(shù)細(xì)胞系。

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