全種屬XOD檢測試劑盒正式測定前務必取2-3個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

XOD（EC 1.17.3.2）催化XOD生成尿酸和超氧陰離子，是活性氧主要來源之一；同時也是核苷酸代謝的關鍵酶之一。XOD主要分布于哺乳動物的心，肺，肝臟等組織中，當肝功能受損時，XOD大量釋放到血清中，對肝損害的診斷具有特異性的意義。

測定原理：

XOD催化XOD產生尿酸，尿酸在290nm下有特征吸收峰。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計/酶標儀、臺式離心機、可調式移液器、微量石英比色皿/96 孔板（UV 板）、

研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液：100mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：30mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×2 瓶，4℃保存。

全種屬XOD檢測試劑盒粗酶液提?。?/span>

1、細菌、細胞或組織樣品的制備：

細菌或培養細胞：先收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（10⁴個）：提取液體積（mL）為500~1000：1的比例（建議500萬細菌或細胞加入1mL提取液），超聲波破碎細菌或細胞（冰浴，功率20％或200W，超聲3s，間隔10s，重復30次）；8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

組織：按照組織質量（g）：提取液體積(mL)為1：5~10的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

2、血清（漿）樣品：直接檢測。

操作步驟：

1、分光光度計或酶標儀預熱30min以上，調節波長至290nm，蒸餾水調零。

2、XOD 檢測工作液的配制：用時在每瓶試劑二中加入15mL試劑一，充分混勻，待用；用不完的試劑 4℃可保存一周；

3、測定前將XOD檢測工作液在37℃（哺乳動物）或25℃（其它物種）水浴10min以上。

4、在微量石英比色皿或96孔板中加入10μL樣本和250μL工作液，立即混勻并計時，記錄290nm下初始吸光值A1和1min后的吸光值A2。計算 ΔA＝A2-A1。

XOD 活性計算：

a. 用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、血清（漿）XOD 計算：

單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘催化產生1nmol尿酸定義為一個酶活力單位。

XOD（nmol/min/mL）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷V 樣÷T=2131×ΔA

2、組織、細菌或細胞中 XOD 計算：

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產生1nmol尿酸定義為一個酶活力單位。

XOD（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V 樣×Cpr)÷T

=2131×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織每分鐘催化產生1nmol尿酸定義為一個酶活力單位。

XOD（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷（W ×V 樣÷V 樣總）÷T

=2131×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每一萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1nmol尿酸定義為一個酶活力單位。

XOD（nmol/min/10⁴cell）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷（500×V 樣÷V 樣總）÷T

=4.26×ΔA

V 反總：反應體系總體積，2.6×10^-4 L；ε：尿酸摩爾消光系數，1.22×10⁴ L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.01 mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應時間，1min；W：樣本質量，g；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；500：細胞或細菌總數，500 萬。

b.用96孔板測定的計算公式如下

全種屬XOD檢測試劑盒1、血清（漿）XOD 計算：

單位的定義：每毫升血清（漿）每分鐘催化產生1nmol尿酸定義為一個酶活力單位。

XOD（nmol/min/mL）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷V 樣÷T=4262×ΔA

2、組織、細菌或細胞中 XOD 計算：

（1）按樣本蛋白濃度計算：

單位的定義：每mg組織蛋白每分鐘催化產生1nmol尿酸定義為一個酶活力單位。

XOD（nmol/min/mg prot）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V 樣×Cpr)÷T

=4262×ΔA÷Cpr

（2）按樣本鮮重計算：

單位的定義：每g組織每分鐘催化產生1nmol尿酸定義為一個酶活力單位。

XOD（nmol/min/g 鮮重）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷（W× V 樣÷V 樣總）÷T

=4262×ΔA÷W

（3）按細菌或細胞密度計算：

單位的定義：每一萬個細菌或細胞每分鐘催化產生1nmol尿酸定義為一個酶活力單位。

XOD（nmol/min/10⁴cell）=[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷（500×V 樣÷V 樣總）÷T

=8.52×ΔA

全種屬XOD檢測試劑盒V 反總：反應體系總體積，2.6×10^-4 L；ε：尿酸摩爾消光系數，1.22×10⁴ L/mol/cm；d：96孔板光徑，0.5cm；V 樣：加入樣本體積，0.01 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：

反應時間，1 min；W：樣本質量，g；Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；500：細胞或細菌總數，500 萬