過氧化氫酶(CAT)檢測試劑盒紫外分光光度法說明書
注意：正式測定之前選擇2-3 個預期差異大的樣本做預測定。
貨號: YX-C-A501
規格: 50T/48S
產品內容：
提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；
試劑一：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 100μL×3 瓶，4℃保存。
產品說明：
CAT(EC 1.11.1.6)廣泛存在于動物、植物、微生物和培養細胞中，是最主要的 H2O2 清除酶，在活性氧清除系統中具有重要作用。
H2O2 在 240nm 下有特征吸收峰，CAT 能夠分解 H2O2，使反應溶液 240nm 下的吸光度隨反應時間而下降，根據吸光度的變化率可計算出 CAT 活性。
試驗中所需的儀器和試劑：
紫外分光光度計、臺式離心機、可調式移液器、1mL 石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水
過氧化氫酶(CAT)檢測試劑盒操作步驟：
一、粗酶液提取：
1、細菌、細胞或組織樣品的制備
細菌或培養細胞：收集細菌或細胞到離心管內，離心后棄上清；按照細菌或細胞數量（104 個）：提取液體積（ml）為 500-1000:1 的比例（建議 500 萬細菌或細胞加入 1ml 提取液），超聲波破碎細菌或細胞（功率 20%或 200w，超聲 3 秒，間隔 10 秒。重復 30 次）；8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。
組織：按照組織質量（g）：提取液體積（ml）為 1：5-10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液），進行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10 分鐘，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
二、CAT 測定操作
1、 分光光度計預熱 30min 以上，調節波長至 240nm 處，蒸餾水調零。
2、 CAT 檢測工作液的配置：用時在每瓶試劑二（100μL）中加入 20ml 試劑一，充分混勻，作為工作液；用不完的試劑 4℃保存一周。
3、 測定前將 CAT 檢測工作液 37℃（哺乳動物）或 25℃（其他物種）水浴 10min。
4、 取 1mLCAT 檢測工作液于 1mL 石英比色皿中，再加入 35μL 樣本，混勻 5s；室溫下立即測定 240nm
下的初始吸光值 A1 和 1min 后的吸光值 A2。計算ΔA=A1-A2
過氧化氫酶(CAT)檢測試劑盒三、CAT 活性計算：
1、 血清（漿）CAT 活力的計算：
單位的定義：每毫升血清（漿）在反應體系中每分鐘催化 1nmol H2O2 降解定義為一個酶活力單位。
CAT（U/mL）＝﹝ΔA×V 反總÷（ε×d）×109﹞÷V 樣÷T=678×ΔA 2、 組織、細菌或細胞中 
CAT 活力計算：
a. 按樣本蛋白濃度計算：
單位的定義：每 mg 組織蛋白在反應體系中每分鐘催化 1nmol H2O2 降解定義為一個酶活力單位。
CAT（U/ mg prot）＝﹝ΔA×V 反總÷（ε×d）×109﹞÷（V 樣×Cpr）÷T=678×ΔA÷Cpr
b. 按樣本鮮重計算：
單位的定義：每 g 組織在反應體系中每分鐘催化 1nmol H2O2 降解定義為一個酶活力單位。
CAT（U/g 鮮重）＝﹝ΔA×V 反總÷（ε×d）×109﹞÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T=678×ΔA÷W

3、 按細菌或細胞中 CAT 活力計算：
單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞在每分鐘反應體系中每分鐘催化 1nmol H2O2 降解定義為一個酶活力單位。
CAT（U/104 cell）＝﹝ΔA×V 反總÷（ε×d）×109﹞÷（500×V 樣÷V 樣總）÷T=1.356×ΔA
過氧化氫酶(CAT)檢測試劑盒V 反總：反應體系總體積，1.035×10-3L；ε: H2O2 摩爾吸光系數，4.36×104L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.035ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應時間，1min。W，樣本質量，g；Cpr：上清液蛋白濃度，mg/ml；500：細胞或細菌總數，500 萬。