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dNTP 溶液（標記）0.5mL實驗步驟

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更新時間：2017-01-17 16:24:38瀏覽次數(shù)：549次

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產(chǎn)品簡介

dNTP 溶液（標記）0.5mL實驗步驟運輸及保存：低溫運輸，-20℃保存，有效期一年。

詳細介紹

dNTP 溶液 ( 標記 )0.5mL實驗步驟產(chǎn)品介紹：

dNTP 溶液 ( 標記 )0.5mL實驗步驟使用方法:
一、交換反應 1. 實驗前需自備的試劑：7 M 醋酸銨、*乙醇、70%乙醇等
2. 在微量離心管中制備下列反應液：成分加入的體積自備的 5’磷酸化 DNA 片段 14 μL(≤5 pmoles 的 5′末端) 5×交換反應緩沖液 5 μL [γ -32P] ATP 5 μL T4 多聚核苷酸激酶（10 U/μL） 1 μL 滅菌的超純水補足到 25 μL 注：5 pmoles 的 5’末端約等于 0.17 μg 的長 100 bp 的雙鏈 DNA。
3. 37℃反應 30 分鐘。
4. 70℃加熱 5～10 分鐘使酶失活。
5. 加入 10 μL 的 7 M CH3COONH4（pH 4.5）。如使用 CH3COONa 做乙醇沉淀時使其終濃度達 300 mM。
6. 加入 87.5 μL（2.5 倍）的冷無水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
7. 離心回收沉淀，用 70%的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 8. 用適當 Buffer 溶解沉淀。注：通過第 5～8 步操作幾乎可以除去大部分未反應的[γ-32P] ATP，如要 *將其除去時，乙醇沉淀后用凝膠過濾等方法精制即可。如需用*抽提除去蛋白質時，請在第
8 步之后進行。
dNTP 溶液 ( 標記 )0.5mL實驗步驟磷酸化反應標記：
A. 去磷酸化反應
1. 實驗前需自備的試劑：TE 飽和酚/、3 M NaCl 、*乙醇、70% 乙醇、牛小腸堿性磷酸酶（CIAP）等 2. 在微量離心管中制備下列反應液：成分加入的體積自備的 DNA 片段 133 μL(≤10 μg) 1 M Tris-HCl，pH 8.0 15 μL 牛小腸堿性磷酸酶（CIAP，10~20 U/μL）
2 μL 滅菌的超純水補足到 150 μL
3. 50℃反應 30 分鐘。
4. 加入 150 μL 的 TE 飽和酚//（25：24：1），充分混勻。
5. 離心，取上層（水層）移到另一個微量離心管中。
6. 重復操作 4～5。
7. 加入 7.5 μL 的 3 M NaCl（zui終濃度 150 mM）。
8. 加入 375 μL（2.5 倍量）的冷無水乙醇，-20℃放置 30～60 分鐘。
9. 離心回收沉淀，用 1 mL 70%的冷乙醇清洗后，沉淀真空干燥。

10. 使用 20 μL 的 TE Buffer 溶解沉淀。
dNTP 溶液 ( 標記 )0.5mL實驗步驟磷酸化反應（前反應）：
1. 在微量離心管中制備下列反應液：

2. 37℃反應 30 分鐘。
3. 下面的操作與交換反應的第 4-8 步操作相同。
合成 DNA 寡核苷酸的標記：
當摻入水平很低的時候，需要使用本步驟，即通過體積排阻色譜或過濾試劑盒除去未反應的標記。Sephadex G-50 層析柱（需另購）對于去除未摻入的 dNTPs 效果很好，它還能大幅減少小于 20 個堿基的 DNA 寡核苷酸和小于 20 bp 的雙鏈 DNA 的量。使用之前需要在 70℃加熱 5～10 分鐘以使 T4 多聚核苷酸激酶失活。Sephadex G-25 層析柱可以用來純化長度不小于 10 個堿基的寡核苷酸。

馬鈴薯葡萄糖瓊脂(PDA)250g用于霉菌,酵母菌計數(shù)
衛(wèi)矛醇半固體瓊脂 10(g) incubation media 衛(wèi)矛醇半固體瓊脂 10(g)
西蒙氏枸櫞酸鹽發(fā)酵管西蒙氏枸櫞酸鹽發(fā)酵管 20支 BR
Fraser培養(yǎng)基250用于李氏菌的增菌培養(yǎng)(MERCK標準)incubationmediaFraser培養(yǎng)基250用于李氏菌的增菌培養(yǎng)(MERCK標準)
DNA酶甲基綠瓊脂基礎 100 用于彎曲桿菌的DNA酶水解試驗(GB標準)
PotatoDextroseAgar
GN增菌液 250(g) incubation media GN增菌液 250(g)
蛋白胨水(*肉湯)發(fā)酵管蛋白胨水(*肉湯)發(fā)酵管 20支 BR
Fraser添加劑5ml*2支添加到HB4用于李氏菌的選擇性增菌培養(yǎng)incubationmediaFraser添加劑5ml*2支添加到HB4用于李氏菌的選擇性增菌培養(yǎng)
DnaseAgarBasewithMethylGreen
馬鈴薯瓊脂培養(yǎng)基250g用于霉菌的鑒定培養(yǎng)
GN增菌液 1000(g) incubation media GN增菌液 1000(g)
無鹽胰胨水發(fā)酵管無鹽胰胨水發(fā)酵管 20支 BR
UVM培養(yǎng)基250用于李氏菌的增菌培養(yǎng)(MERCK標準)incubationmediaUVM培養(yǎng)基250用于李氏菌的增菌培養(yǎng)(MERCK標準)
布氏瓊脂 250g 用于彎曲桿菌的抗生素敏感性試驗和純化培養(yǎng)。
PotatoAgarMedium
木糖-賴氨酸-去氧膽酸鹽培養(yǎng)基(XLD) 250(g) incubation media 木糖-賴氨酸-去氧膽酸鹽培養(yǎng)基(XLD) 250(g)
3% NaC1胰胨水發(fā)酵管 3% NaC1胰胨水發(fā)酵管 20支 BR
UVM添加劑*加到HB4用于李氏菌的選擇性增菌培養(yǎng)incubationmediaUVM添加劑*加到HB4用于李氏菌的選擇性增菌培養(yǎng)
BrucellaAgar
馬鈴薯葡萄糖水250g用于椰毒假單胞酵米面亞種和真菌的增菌培養(yǎng)
40%尿素水 5mL/支×10(g) incubation media 40%尿素水 5mL/支×10(g)
7% NaC1胰胨水發(fā)酵管 7% NaC1胰胨水發(fā)酵管 20支 BR
LM-250用于膜濾法單增李氏菌選擇性分離(NEOGEN標準)incubationmediaLM-250用于膜濾法單增李氏菌選擇性分離(NEOGEN標準)
馬尿酸鈉培養(yǎng)基 250g 用于彎曲桿菌的馬尿酸鈉水解試驗(GB標準)

dNTP 溶液 ( 標記 )0.5mL實驗步驟〖〖性狀〗(以下信息僅供參考)〗：黃色至黃綠色結晶粉末。溶于甲醇、乙醇、乙二醇，微溶于水，其溶液呈略帶紫的藍色熒光
〖用途〗：本品僅供科研，不得用于其它〖用途〗。(以下〖用途〗僅供參考)適用于以閃光燈、氮分子、氬離子、YAG-TH grass、-THX-eCl等為泵浦光源的可調諧染料激光器。是一種激光轉化率較高、穩(wěn)定性好的激光染料，屬藍綠波段。熒光標記試劑，用于痕量檢測酶。
〖保存〗：2～8℃
香豆素
〖英文名稱〗：Coumarin；1,2-Benzopyrone；5,6-Benzo-2-pyrone；cis-o-Coumarinic acid lactone；Coumarinic anhydride；Tonka bean camphor
〖其他名稱〗：香豆內酯；1,2-苯并哌哢；氧雜萘鄰酮；鄰氧萘酮；苯并鄰氧芑酮；1,2-苯并吡喃酮；2H-1-苯并吡喃-2-酮
〖CAS號〗：91-64-5
C9H6O2=146.14
-Benzylide