【溫馨提示】細胞用途：只可用于科研，不可用于臨床診斷和治療。
1.產品名稱：小鼠骨內膜間充質干細胞操作步驟
2.組織來源：股骨、脛骨組織
3.產品規格：5×10^5cells/T25細胞培養瓶
4.細胞簡介：
小鼠骨內膜間充質干細胞分離自股骨、脛骨；骨內膜是一層致密結締組織膜，覆蓋在骨的表面（關節面除外），新鮮骨內膜呈粉紅色，含有豐富的血管、神經和成骨細胞。此外，附著于骨的肌腱、韌帶于附著部位都與骨內膜編織在一起。因而骨內膜與骨質結合甚為牢固。骨內膜富含血管、神經，通過骨質的滋養孔分布于骨質和骨髓。骨內膜分內、外兩層，外層主要是粗大的膠原纖維束，部分纖維穿入骨質，使骨內膜固定于骨面；內層疏松，含成骨細胞和破骨細胞（分別具有產生新骨質和改建骨的功能）。骨髓腔和骨松質的網眼也襯著一層菲薄的結締組織膜，叫做骨膜。骨內膜的內層和骨膜有分化成骨細胞和破骨細胞的能力，以形成新骨質和破壞、改造已生成的骨質，所以對骨的發生、生長、修復等具有重要意義。骨內膜間充質干細胞是一種具有高度自我更新能力和多向分化潛能的干細胞，可以向骨、軟骨、肌組織、皮膚、脂肪、神經等多種組織分化，因此可以作為組織工程中的種子細胞。骨內膜間充質干細胞的體外培養條件要求較高，在培養過程中，受貼壁時間、種植密度、血清含量、培養溫度和培養基pH值等條件的影響。
本公司的小鼠骨內膜間充質干細胞采用沖洗骨髓、消化骨內膜、差速貼壁法結合培養基篩選制備而來，細胞總量約為5×10^5cells/瓶；細胞經CD90/CD44、CD34/CD45免疫熒光鑒定，純度可達90%以上，且不含有HIV-1、HBV、HCV、支原體、細菌、酵母和真菌等。
5.培養基信息：
DMEM-F12、FBS、間充質干細胞生長添加劑、Glutamine、Penicillin、Streptomycin等
冷凍保存方法一：冷凍管置于4℃300分鐘→(-20℃30分鐘*)→-80℃16~18小時(或隔夜)→液氮槽*儲存。
冷凍保存方法二：冷凍管置于已設定程序之可程序降溫機中每分鐘降1-3℃至–80℃以下，再放入液氮槽期儲存。-20℃不可超過1小時，以防止冰晶過大，造成細胞大量死亡，也可跳過此步驟直接放入-80℃冰箱中，但存活率稍微降低一些。
操作步驟：
一．培養基及培養凍存條件準備：
1、準備RPMI-1640培養基(RPMI-1640:GIBCO,貨號31800022, 添加NaHCO3 1.5g/L, D-葡萄糖2.5g/L, 丙酮酸鈉 0.11g/L)，90%；優質胎牛血清，10%。
2、培養條件： 氣相：空氣，95%；二氧化碳，5%。 溫度：37攝氏度，培養箱濕度為70%-80%。
3、凍存液：90%*培養基，10%DMSO，現用現配。液氮儲存。
二、細胞處理：
1、復蘇細胞：將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍，加入4mL培養基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養瓶中培養過夜（或將細胞懸液加入10cm皿中，加入約8ml培養基，培養過夜）。第二天換液并檢查細胞密度。
2、細胞傳代：如果細胞密度達80%-90%，即可進行傳代培養。
對于貼壁細胞，傳代可參考以下方法：
1)棄去培養上清，用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。
2)加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培養瓶中，置于37℃培養箱中消化1-2分鐘，然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況，若細胞大部分變圓并脫落，迅速拿回操作臺，輕敲幾下培養瓶后加少量培養基終止消化。
3)按6-8ml/瓶補加培養基，輕輕打勻后吸出，在1000RPM條件下離心4分鐘，棄去上清液，補加1-2mL培養液后吹勻。
4)將細胞懸液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培養基的新皿中或者瓶中。
優勢：
1、細胞株種類齊全，包括腫瘤細胞、正常細胞、耐藥細胞株，如：人滑膜細胞，人胃癌細胞，人細胞，人腎近曲小管上皮細胞，肝癌細胞，心肌細胞，子宮內膜細胞等
2、*，專業的細胞培養技術指導
3、購買本公司的細胞株，免費復蘇
4、客戶收到細胞后一天回傳細胞圖片，三天回傳細胞生長狀態圖片，五天內有問題公司負責重發，超過五天時限至一個月內重發細胞收半價，超過一個月重發全額收費。
5、經濟、實惠、可靠，完善、穩定的實驗體系，優秀的科研隊伍，*的實驗設備、準確可靠的實驗結果，是您可靠的合作伙伴
6、此外，我們還可以提供Elisa試劑盒、細胞株、抗體、血清、培養基、常用生化試劑、耗材。
磷酸化增殖細胞核多肽抗原
足細胞特異蛋白抗原
血小板源性生長因子-BB抗原
胰十二指腸同源異型盒基因抗原
果膠酶抗原
肝癌高表達基因抗原
腦啡肽
腸道肽轉運蛋白2/小肽轉運蛋白2抗原
蛋白激酶R樣內質網激酶抗原
纖維束蛋白同源物1/肌動蛋白集束蛋白/圓線蟲紫癜 抗原
*原C蛋白抗原
過氧化物酶體增殖物激活受體γ輔激活子1α抗原
顆粒蛋白前體抗原
抑制素/腫瘤抑制因子抗原
蛋白激酶A(多肽)
*型纖溶酶原激活因子（多肽）
平足蛋白抗原
多囊腎蛋白1抗原
多囊腎蛋白2抗體
磷酸化蛋白激酶B抗原（*磷酸化位點：473）
Raf激酶抑制蛋白抗原
乙肝病毒pre-X蛋白抗原（N端）
乙肝病毒pre-X蛋白抗原（C端）
*羥化酶(多肽)
新型金屬基質蛋白酶(抗原)
脂聯素受體-1(抗原)
脂聯素受體-2(抗原)
前列腺酸性磷酸酶抗原
前列腺酸性磷酸酶抗原(人)
P選擇素抗原
溶酶體膜糖蛋白抗原
一種腫瘤抑制基因抗原（C端）
微白蛋白/細小清蛋白抗原
酪酪肽多肽（1-36）
Rad51抗原
Rap1A抗原
維甲酸受體-β抗原
Ras相關區域家族1A抗原
PAF ELISA Kit 大鼠血小板活化因子 48T
P III NT ELISA Kit 大鼠Ⅲ型前膠原氨基端肽 48T
Col III ELISA Kit 大鼠Ⅲ型膠原 48T
CRP ELISA Kit 大鼠C反應蛋白 48T
TPA ELISA Kit 大鼠組織多肽抗原 48T
t-PA ELISA Kit 大鼠組織型纖溶酶原激活劑 48T
TF ELISA Kit 大鼠組織因子 48T
VD ELISA Kit 大鼠* 48T
VK1 ELISA Kit 大鼠*1 48T
VB12 ELISA Kit 大鼠*12 48T
VD3 ELISA Kit 大鼠*3 48T
VD2 ELISA Kit 大鼠*2 48T
VE ELISA Kit 大鼠* 48T
VA ELISA Kit 大鼠* 48T
Beta-TG ELISA Kit 大鼠β血小板球蛋白/β血栓環蛋白 48T
PF-4/CXCL4 ELISA Kit 大鼠血小板因子4 48T
DHT ELISA Kit 大鼠雙氫睪酮 48T
CTGF ELISA Kit 大鼠結締組織生長因子 48T
AsAb ELISA Kit 大鼠抗抗體 48T
PTH ELISA Kit 大鼠甲狀旁腺激素 48T
HIS ELISA Kit 大鼠組胺 48T
IL-13 ELISA KIT 大鼠白介素13 48T
IL-15 ELISA KIT 大鼠白介素15 48T
IL-16 ELISA KIT 大鼠白介素16 48T
IL-17 ELISA KIT 大鼠白介素17 48T
IL-1sR I ELISA Kit 大鼠白介素1可溶性受體Ⅰ 48T
sE-selectin ELISA Kit 大鼠可溶性E選擇素 48T
IL-1sR II ELISA Kit 大鼠白介素1可溶性受體Ⅱ 48T
17-OHCS ELISA Kit 大鼠17羥皮質類固醇
