產品參數：
中文名稱 | 英文名稱 | 產品規格 | 產品貨號 |
PKD抑制劑（CRT0066101 dihydrochloride） | CRT0066101 dihydrochloride | 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg | BJ-01X8532 |
商品詳細介紹：
CRT0066101dihydrochloride是有效，選擇性的PKD抑制劑，對PKD1，2和3的IC50值分別為1，2.5和2nM。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫療及其他用途！ ：1883545-60-5 純度：98.94% 分子量：374.87 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內使用。 |
實驗報告：
一、分離與培養：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大小；
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養基混懸，接種于25cm2培養瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養箱中培養；
5、差速貼壁1h后，吸出培養基，按實驗需要接種于6孔板中繼續培養；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
培養操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養板（每孔一片）或培養皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經過計數的細胞懸浮液移入培養板中，使蓋玻片*浸在培養液中；
5．將培養板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養板底部2/3面積時，將培養板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。 
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養，而不適用于懸浮細胞培養，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優質玻璃，并經過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態一致的細胞，可以使用較大的培養皿，但不宜過大，以避免培養液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作要點：
1）將培養基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內，再逐步轉移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內，將管內細胞轉移至準備好的離心管內，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產生氣泡。用新鮮培養基洗管壁2次，均轉移至離心管內。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉移至T25細胞瓶內，補加適量的培養基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內培養。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養基以去除死細胞。繼續培養，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續的實驗。
大鼠 FCAMR 基因全長ORF克隆1.00671011110113E+19 熒光、比色、化學發光
大鼠 FCGRT 基因全長ORF克隆10016 熒光
大鼠 FCER1G 基因全長ORF克隆5001750113 比色
大鼠 CD31 基因全長ORF克隆50019 比色
大鼠 YWHAE 基因全長ORF克隆1001610135 熒光
大鼠 UCHL1 基因全長ORF克隆101491229812299 熒光
大鼠 CA13 基因全長ORF克隆50017 比色
大鼠 UCHL3 基因全長ORF克隆10155 比色
大鼠 CD4 基因全長ORF克隆10151 比色
大鼠 CCL27 基因全長ORF克隆細氧化應激活性氧（ROS）比色法定量檢測試劑盒（羥自由基） 20次
大鼠 WFDC2 基因全長ORF克隆超氧化物歧化（SOD）活性檢測試劑盒 50次
PKD抑制劑（CRT0066101 dihydrochloride）ABCA5 三磷酸苷結合盒轉運蛋白A亞基5抗體 規格: 0.2mlMCP1/CCL2 單核細胞趨化蛋白1抗體 規格: 0.1ml
CCDC25 卷曲螺旋結構域蛋白25抗體 規格: 0.2ml
phospho-IL-1R1(Tyr496) 磷酸化白介素1受體1抗體 規格: 0.1ml
NR2C/NMDAR2C 谷受體2C抗體 規格: 0.2mlRNF15 環指蛋白15抗體 規格: 0.2ml
Hyaluronidase2 透明質酸2/玻璃酸2抗體 規格: 0.2ml
phospho-KCND2/Kv4.2(Thr607) 磷酸化電壓門控性鉀通道蛋白Kv4.2抗體 規格: 0.1ml
CYP2E1 細胞色素P450ⅡE1抗體 規格: 0.1ml
NOX5 還原型輔Ⅱ氧化嘌呤二核苷酸磷酸抗體 規格: 0.2ml
Donkey anti-human IgG whole serum 驢抗人IgG抗清 規格: 1mlCBFA1/RUNX2 核心結合因子α1抗體(成骨特異性轉錄因子)Cbfα1 規格: 0.1ml
LOX-1/OLR1 凝集素樣氧化型脂蛋白受體抗體 規格: 0.2ml
BOb-1/POU2AF1 B細胞特異性轉錄因子抗體 規格: 0.1ml
