培養(yǎng)操作步驟 ：
1．用蓋片鑷將蓋玻片自75%乙醇中取出，用無菌絲綢布擦拭干凈，不要用紗布；
2．將蓋玻片輕輕放入6孔培養(yǎng)板（每孔一片）或培養(yǎng)皿中（每個平皿可放置2-3片）；
3．在距離紫外燈直射范圍內(nèi)20-30 厘米處照射2-3小時；
4．將經(jīng)過計數(shù)的細胞懸浮液移入培養(yǎng)板中，使蓋玻片*浸在培養(yǎng)液中；
5．將培養(yǎng)板在5% CO2水浴孵箱中37℃孵育2-3天，當貼壁細胞生長至覆蓋培養(yǎng)板底部2/3面積時，將培養(yǎng)板取出，用蓋片鑷輕輕取出蓋玻片，用蒸餾水漂洗后即可進行快速固定以及免疫細胞化學檢測。
產(chǎn)品參數(shù)：
中文名稱 | 英文名稱 | 產(chǎn)品規(guī)格 | 產(chǎn)品貨號 |
Src抑制劑（KX2-391 dihydrochloride） | KX2-391 dihydrochloride | 1mL(10mM)|5mg|10mg | BJ-01X8158 |
商品詳細介紹：
KX2-391dihydrochloride是Src的抑制劑，在腫瘤細胞中，GI50值為9-60nM。 注：本品僅可用于科研實驗，嚴禁用于臨床醫(yī)療及其他用途！ ：1038395-65-1 純度：98.62% 分子量：504.45 儲存條件：-20℃，有效期2年，溶入溶劑后-20℃請盡量在一個月內(nèi)使用。 |
實驗報告：
一、分離與培養(yǎng)：
1、無菌條件下，取出1-3d 齡SD大鼠心房組織，然后用PBS將此組織塊清洗2次，最后將組織剪成1mm3左右大?。?/span>
2、往組織塊中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型膠原酶），混懸10s，置37℃條件下消化10min，之后用滴管吹打制成單細胞懸液，自然沉淀并收集上清，用含10% FBS培養(yǎng)基終止消化后4℃放置；
3、剩下的組織再加入3～4mL酶消化液，混懸10s，置37℃消化10 min后，按上述方法收集上清并終止消化后4℃放置，重復此步驟2-3次，直至組織*被消化；
4、用200目不銹鋼篩網(wǎng)過濾細胞消化液，1200r/min 離心10min，棄去上清，沉淀細胞用含有10％ FBS DMEM/F12培養(yǎng)基混懸，接種于25cm2培養(yǎng)瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培養(yǎng)箱中培養(yǎng)；
5、差速貼壁1h后，吸出培養(yǎng)基，按實驗需要接種于6孔板中繼續(xù)培養(yǎng)；
二、免疫熒光鑒定：
1、待心房肌細胞生長至80%融合時，棄去培養(yǎng)基，用溫育的PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室溫條件下固定細胞15min；
2、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在4℃條件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3、PBS沖洗細胞2次，每次10min，然后在室溫條件下，用4% BSA封閉細胞30min；
4、按1: 100的比例稀釋α-actin一抗，然后將其放在4℃冰箱中孵育細胞過夜；
5、PBS沖洗細胞3次，每次10min，按1：150的比例稀釋抗α-actin的二抗， 37℃條件下放置1h；
6、用PBS沖洗3次，每次10min，最后在倒置熒光顯微鏡下觀察圖像并拍照。
實驗要點及說明：
1．本方法適用于貼壁細胞培養(yǎng)，而不適用于懸浮細胞培養(yǎng)，懸浮細胞可使用滴片法；
2．所使用的蓋玻片應該為優(yōu)質(zhì)玻璃，并經(jīng)過鉻酸洗液處理；
3．蓋玻片非常薄，易碎，取放蓋玻片時動作要輕；
4．如果需要更多生長狀態(tài)一致的細胞，可以使用較大的培養(yǎng)皿，但不宜過大，以避免培養(yǎng)液的浪費和增加污染機率；
5．如果細胞貼壁生長能力較差，可將蓋玻片在0.5%多聚賴氨酸溶液中浸泡5-10分鐘并自然晾干。
操作要點：
1）將培養(yǎng)基在37℃水浴鍋預熱；準備一個15mL無菌的離心管，加入8mL預熱培養(yǎng)基。
2）將凍存細胞從液氮罐中取出，快速放入37℃水浴鍋中復溫（可準備一潔凈的燒杯，裝滿37℃的水，細胞凍存管取出后迅速放入燒杯內(nèi)，再逐步轉(zhuǎn)移到水浴鍋中）。輕輕晃動凍存管，使細胞能在1~2min內(nèi)*解凍，使細胞能盡快通過最易受損的溫度段（-5~0℃）。注意凍存管管口不能沒入水中，BRL(大鼠肝細胞)避免引起污染。
3）用75%酒精擦拭凍存管后再置于超凈臺內(nèi)，將管內(nèi)細胞轉(zhuǎn)移至準備好的離心管內(nèi)，輕輕吹打液體，使細胞均勻分散，降低DMSO濃度，吹打時避免產(chǎn)生氣泡。用新鮮培養(yǎng)基洗管壁2次，均轉(zhuǎn)移至離心管內(nèi)。
4）800rpm離心5min，棄上清，加入新鮮的培養(yǎng)基，吹打制成細胞懸液。
5）將細胞懸液轉(zhuǎn)移至T25細胞瓶內(nèi)，補加適量的培養(yǎng)基，輕輕晃動細胞瓶使細胞分布均勻，放入溫箱內(nèi)培養(yǎng)。
6）第二天觀察細胞貼壁生長情況，換新鮮培養(yǎng)基以去除死細胞。繼續(xù)培養(yǎng)，待細胞長至80~90%匯合時正常傳代。一般剛復蘇的細胞需經(jīng)過2~3次傳代，細胞活力恢復后才能進行后續(xù)的實驗。
人 SSTR2 基因全長ORF克隆人激肽釋放2(hK 2)免疫試劑盒進口、組裝
人 PAEP 基因全長ORF克隆人激肽釋放11(KLK 11)免疫試劑盒進口、分裝
人 REG3G 基因全長ORF克隆人激肽釋放10(KLK 10)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應
人 LUM 基因全長ORF克隆人激肽釋放1(KLK 1)免疫試劑盒*直銷
人 REG1B 基因全長ORF克隆人激素敏感性脂肪(HSL)免疫試劑盒進口、組裝
Human ALDH1A3 Gene cDNA Clone (full-length ORF Clone)人激動異構(gòu)/細胞分裂素MB(CKMB)免疫試劑盒進口、分裝
人 DLL1 基因全長ORF克隆人基質(zhì)細胞衍生因子1β(SDF-1β/SDF1B)免疫試劑盒現(xiàn)貨供應
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人 BRAF 基因全長ORF克隆人基質(zhì)裂解蛋白/基質(zhì)溶素(MAT)免疫試劑盒進口、組裝
人 CAPZA1 基因全長ORF克隆人基質(zhì)金屬蛋白組織抑制因子1(TIMP-1)免疫試劑盒進口、分裝
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Src抑制劑（KX2-391 dihydrochloride）CYP3A4和CYP2C19介導抑制劑(Stiripentol) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg Stiripentol100mL 三 TFA(Trifluoroacetic Acid) 室溫保存
5HT1A受體激動劑(F 11440) 1mL(10mM)|1mg|5mg|10mg|50mg F 11440Fraser(FB2)添加劑 Fraser Supplement 5ml*2
GABA轉(zhuǎn)氨酶抑制劑(L-DABA) 1mL(10mM)|100mg L-DABA1 管 JM101大腸桿菌 JM101 E.coli Strain -80℃保存
多巴胺D2受體激動劑(Neuromedin N) 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg Neuromedin N2 ug pRSV-rev pRSV-rev 低溫運輸，-20℃保存
多巴胺D2受體(D2R)激動劑(Piribedil) 1mL(10mM)|10mg|50mg|100mg|200mg|500mg Piribedil100mL 冷凍型血液RNA保存液 常溫
神經(jīng)遞質(zhì)突觸前釋放抑制劑(Bretylium tosylate) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg|200mg Bretylium tosylate2 ug pcDNA3.1/Myc-His C pcDNA3.1/Myc-His C 低溫運輸，-20℃保存
電壓門控鈉通道Nav1.7抑制劑(AM-2099) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg AM-2099YM培養(yǎng)基 YM Medium 250g
NO synthesis抑制劑（Imperatorin） 1mL(10mM)|5mg|10mg|25mg|50mg Imperatorin500mL 甲醇 Methanol 室溫密封保存
腺苷受體激動劑(PD 117519) 1mL(10mM)|5mg|10mg|50mg|100mg PD 11751950T 牛病毒性腹瀉病毒（BVDV）核酸檢測試劑盒（RT-PCR） 低溫運輸，-20℃保存
BACE1抑制劑(Lanabecestat) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|50mg|100mg Lanabecestat1 mg BCECF AM Fluorescent Probe and Tracer -20℃保存
VMAT2抑制劑(Valbenazine) 1mL(10mM)|2mg|5mg|10mg|25mg|50mg|100mg ValbenazineBETA-SSA瓊脂 BETA-SSA Agar 250g
