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人大隱靜脈組織提取物說明書 | Vascular: Normal Human Saphenous Vein Derivatives | EYX99334 |
人大隱靜脈組織提取物【Vascular: Normal Human Saphenous Vein Derivatives】
大隱靜脈是長的靜脈,靜脈血管壁薄、內(nèi)腔大,內(nèi)膜折疊形成靜脈瓣。靜脈瓣一般成對(duì)排列,呈半月狀小袋,袋口朝向心,利于靜脈回流,防止血液逆流。公司科技提供來自新鮮或冷凍人大隱靜脈組織中高質(zhì)量的總RNA,PCR準(zhǔn)備的第一條cDNA鏈,蛋白質(zhì)及其亞組分。這些臨床定義的正常人體組織標(biāo)本采集自各地方醫(yī)院,采集工作根據(jù)IRB和HIPAA批準(zhǔn)的方案進(jìn)行。所有的產(chǎn)品在發(fā)貨之前均經(jīng)過嚴(yán)格的QA/QC流程
總RNA制備:利用Qiagen RNeasy Kit的Trizol試劑分離RNA,然后用Qiagen RNA Clean Kit進(jìn)行純化。生物科技提供的總RNA樣品附有RNA樣品總濃度、總含量、電泳照片、OD值測(cè)定結(jié)果等。
cDNA制備:純化后的總RNA來合成cDNA第一鏈,以50ul總反應(yīng)體系進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄,體系中包括MMLV反轉(zhuǎn)錄酶和隨機(jī)引物以及10mg總RNA。68℃反應(yīng)10min 后終止RT反應(yīng)。利用1x RT Buffer 運(yùn)輸cDNA,1 ul cDNA 足夠做一次PCR反應(yīng)。所有cDNA產(chǎn)品在訂單發(fā)貨之前都經(jīng)過了嚴(yán)格的QA/QC分析,保證了產(chǎn)品的質(zhì)量。
蛋白制備:利用改良型RIPA Buffer (50mMTris, pH7.2, 150mM NaCl, 1mM EDTA, 1mM EGTA, 1% NP-40 , 1mM Na3VO4, 5mM NaF, 400uM PMSF, 1ug/ml of Pepstatin A, 5ug/ml of Aprotinin, 5ug/ml of Leupeptin)制備人關(guān)節(jié)軟骨組織裂解液,離心去除組織碎片,通過Bio-Rad蛋白檢測(cè)試劑盒測(cè)定蛋白濃度,組織蛋白稀釋后用非還原蛋白Buffer (50 mM Tris-HCl, pH 6.8, 5% Glycerol, 1% SDS, 0.002% Bromphenol Blue)添加5%β-巰基乙醇及PMSF,-80度保存。
細(xì)胞培養(yǎng)方法;
1、細(xì)胞傳代:細(xì)胞密度達(dá)到80-90%時(shí)即可傳代
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次;
②加入2ml0.25%胰酶(T25瓶),使胰酶覆蓋整個(gè)瓶或皿,蓋好放入培養(yǎng)箱消化;
③1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,若大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;若細(xì)胞還是貼壁,放回培養(yǎng)箱繼續(xù)消化至可以輕輕吹打下為止;
④將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清;
⑤用新鮮培養(yǎng)基重懸后加入培養(yǎng)瓶或皿中,T25培養(yǎng)瓶加6-8ml培養(yǎng)基;
⑥懸浮細(xì)胞直接離心收集,細(xì)胞沉淀重懸后分到新培養(yǎng)瓶中。
2、細(xì)胞復(fù)蘇:
①將凍存管在37℃溫水中快速搖晃融化,時(shí)間1min左右,加入4-5ml培養(yǎng)基混勻。
②在1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1-2ml培養(yǎng)基吹勻,將細(xì)胞懸液加入培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加適量培養(yǎng)基。
3、細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長狀態(tài)良好時(shí)進(jìn)行細(xì)胞凍存保種
①棄去培養(yǎng)上清,用PBS或生理鹽水清洗1-2次,加入1mL 0.25%胰蛋白酶(T25瓶)
②1-2min后,顯微鏡下觀察細(xì)胞,大部分細(xì)胞回縮且有少量細(xì)胞脫落,輕輕吹打下確認(rèn)消化情況后加入*培養(yǎng)基終止消化;
③將細(xì)胞懸液1000RPM左右條件下離心4min,棄上清,加1ml凍存液重懸細(xì)胞;
④將凍存管放入程序降溫盒,放入-80℃冰箱,4小時(shí)后將凍存管轉(zhuǎn)入液氮罐儲(chǔ)存。
實(shí)驗(yàn)事項(xiàng);
1. 試劑準(zhǔn)備:所有試劑都必須在使用前達(dá)到室溫,使用后請(qǐng)立即按照說明書要求保存試劑。 實(shí)驗(yàn)操作中請(qǐng)使用一次性的吸頭,避免交叉污染。
2. 加樣:加樣或加試劑時(shí),請(qǐng)注意在吸取標(biāo)本 / 標(biāo)準(zhǔn)品,酶結(jié)合物或底物時(shí),前一個(gè)孔與后一個(gè)孔加樣之間的時(shí)間間隔如果太大,將會(huì)導(dǎo)致不同的“預(yù)孵育"時(shí)間,從而明顯地影響到測(cè)量值的準(zhǔn)確性及重復(fù)性。一次加樣時(shí)間(包括標(biāo)準(zhǔn)品及所有樣品)好控制在10分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用多道移液器加樣。
3. 孵育:為防止樣品蒸發(fā),試驗(yàn)時(shí)將反應(yīng)板放于鋪有濕布的密閉盒內(nèi),酶標(biāo)板加上蓋或覆膜,以避免液體蒸發(fā);洗板后應(yīng)盡快進(jìn)行下步操作,任何時(shí)侯都應(yīng)避免酶標(biāo)板處于干燥狀態(tài);同時(shí)應(yīng)嚴(yán)格遵守給定的孵育時(shí)間和溫度。
4. 洗滌:洗滌過程中反應(yīng)孔中殘留的洗滌液應(yīng)在濾紙上充分拍干,勿將濾紙直接放入反應(yīng)孔中吸水,同時(shí)要消除板底殘留的液體和手指印,避免影響后的酶標(biāo)儀讀數(shù)。
5. 試劑配制:Detection A及Detection B在使用前請(qǐng)手甩幾下或少時(shí)離心處理,以使管壁或瓶蓋的液體沉積到管底。標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液、檢測(cè)溶液B工作液請(qǐng)依據(jù)所需的量配置使用,并使用相應(yīng)的稀釋液配制,不能混淆。請(qǐng)確配置標(biāo)準(zhǔn)品及工作液,盡量不要微量配置(如吸取檢測(cè)溶液A時(shí),一次不要小于10μl),以避免由于不準(zhǔn)確稀釋而造成的濃度誤差;請(qǐng)勿重復(fù)使用已稀釋過的標(biāo)準(zhǔn)品、檢測(cè)溶液A工作液或檢測(cè)溶液B工作液。
6. 反應(yīng)時(shí)間的控制:加入底物后請(qǐng)定時(shí)觀察反應(yīng)孔的顏色變化(比如,每隔10分鐘),如顏色較深,請(qǐng)?zhí)崆凹尤虢K止液終止反應(yīng),避免反應(yīng)過強(qiáng)從而影響酶標(biāo)儀光密度讀數(shù)。
7. 底物:底物請(qǐng)避光保存,在儲(chǔ)存和溫育時(shí)避免強(qiáng)光直接照射。
建議檢測(cè)樣品時(shí)均設(shè)雙孔測(cè)定,以保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性。
如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過高,請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以稀釋倍數(shù)。
Super Fluor 5551 mgMenthyl-(4-amino-oxoH-pyrimidin-yl)-[1,3]oxathiolane-carboxylic acid142
Super Fluor 555 SE5mg5-(4-(2-(5-Ethylpyridin-yl)ethoxy)benzylidene)thiazolidine,4-dione14498
Super Fluor 6475mgLeflunomide7562來氟米特
Super Fluor 647 SE1 mgLafutidine1182888拉呋替丁
Super Fluor 65mg3-Ethyl-methyl-pyrrolin-one7666
Epiandrosterone 中文名:表雄酮 分子式:C19H30O2 度:98.0% 小鼠α2抗纖溶酶(α2-AP)ELISA試劑盒
Androstanolone 17-benzoate 中文名:雄諾龍苯甲酸酯 分子式:C26H34O3 度:98.0% 小鼠α1微球蛋白(α1-MG)ELISA試劑盒
Rosuvastain Calcium 中文名:瑞舒伐他汀鈣 分子式:C22H28FN3O6S 度:98.0% 小鼠α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA試劑盒
Ambrisentan 中文名:安倍生坦 分子式:C22H22N2O4 度:98.0% 小鼠T細(xì)胞活化連接蛋白(LAT)ELISA試劑盒
Propacetamol hydrochloride 中文名:鹽酸丙帕他莫 分子式:C14H21ClN2O3 度:98.0% 小鼠T細(xì)胞活化連接蛋白elisa試劑盒 小鼠T細(xì)胞活化連接蛋白試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 小鼠T細(xì)胞活化連接蛋白試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:小鼠T細(xì)胞活化連接蛋白試劑盒、小鼠T細(xì)胞活化連接蛋白eisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。
人參皂苷Rh3(標(biāo)準(zhǔn)品) Ginsenoside Rh3 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠肌細(xì)胞生成素(MYOG)ELISA試劑盒 ,英文名: MYOG ELISA Kit
人參皂苷Ro(標(biāo)準(zhǔn)品) Ginsenoside Ro 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠肌營養(yǎng)不良蛋白(DMD)ELISA試劑盒 ,英文名: DMD ELISA Kit
肉豆蔻木脂素(標(biāo)準(zhǔn)品) Myrislignan 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠肌營養(yǎng)不良蛋白關(guān)聯(lián)糖蛋白1(DAG1)ELISA試劑盒 ,英文名: DAG1 ELISA Kit
肉桂醇(標(biāo)準(zhǔn)品) Cinnamyl alcohol 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠肌原纖蛋白1(FBN1)ELISA試劑盒 ,英文名: FBN1 ELISA Kit
肉桂醛(標(biāo)準(zhǔn)品) Cinnamaldehyde 質(zhì)量規(guī)格:GC≥99%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠基端前腦素(-ProBNP)ELISA試劑盒 ,英文名: -ProBNP ELISA Kit
肉桂酸(標(biāo)準(zhǔn)品) trans-Cinnamic acid 質(zhì)量規(guī)格:GC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠基端前心肽(-ProANP)ELISA試劑盒 ,英文名: -ProANP ELISA Kit
瑞香素/祖師麻甲素(標(biāo)準(zhǔn)品) Daphnetin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠基己糖苷酶Aα(HEXα)ELISA試劑盒 ,英文名: HEXα ELISA Kit
三氯蔗糖(標(biāo)準(zhǔn)品) Sucralose 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠基己糖苷酶Bβ(HEXβ)ELISA試劑盒 ,英文名: HEXβ ELISA Kit
三七皂甙R1(標(biāo)準(zhǔn)品) Notoginsenoside R1 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠基質(zhì)γ羧基谷酸蛋白(MGP)ELISA試劑盒 ,英文名: MGP ELISA Kit
三葉豆紫檀苷(標(biāo)準(zhǔn)品) Trifolirhizin 質(zhì)量規(guī)格:HPLC≥98%,標(biāo)準(zhǔn)品 小鼠基質(zhì)金屬蛋白酶1(MMP-1)ELISA 試劑盒 96T/48T 試劑盒 組裝/原裝
人大隱靜脈組織提取物說明書兔色素上皮衍生因子elisa試劑盒 兔色素上皮衍生因子試劑盒 規(guī)格型號(hào):96T/48T 兔色素上皮衍生因子試劑盒,規(guī)格型號(hào):96T/48T,來源:elisa試劑盒(進(jìn)口分裝),產(chǎn)品別名:兔色素上皮衍生因子試劑盒、兔色素上皮衍生因子 elisa試劑盒 保存條件:2-8℃ 保質(zhì)期:6個(gè)月。 5-Benzimidazolecarboxylic acid 15788-16-6 中文名:5-苯并咪唑甲酸 分子式:C8H6N2O2 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
兔色素上皮衍生因子(PEDF)ELISA試劑盒 5-Benzoylpentanoic acid 中文名:5-苯甲酰基戊酸 分子式:C12H14O3 度:98.0%
兔色素上皮衍生因子(PEDF)ELISAKit 5-Azacytidine 320-67-2 中文名:5-氮胞苷 分子式:C8H12N4O5 度:98.0% 關(guān)鍵詞:
兔軟骨糖蛋白39(rabbit YKL-40) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝 5-Chloro-2-nitrobenzoic acid 中文名: 分子式:C7H4ClNO4
兔軟骨寡聚基質(zhì)蛋白(rabbit COMP) 作用: ELISA 規(guī)格: 48T/96T 進(jìn)口分裝 4-Hydroxythiobenzamide 中文名: 分子式: 度:98.0%
注意事項(xiàng);
1. 接收到,肉眼觀察細(xì)胞培養(yǎng)基顏色,顯微鏡觀察細(xì)胞生長情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收到時(shí)的培養(yǎng)瓶拍一張照片,顯微鏡拍收到時(shí)的細(xì)胞100X,200X各一張)。
2.用75%的酒精消毒(建議配置75%的酒精的水是滅菌過的)。
3.嚴(yán)格無菌操作,打開細(xì)胞培養(yǎng)瓶。
4.將細(xì)胞培養(yǎng)瓶?jī)?nèi)的培養(yǎng)基用吸管*吸出(嚴(yán)禁直接傾倒),放入另一無菌容器中(建議換新的培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞)。
5.用PBS 2-3ml/次輕輕洗細(xì)胞表面,洗3-4次遍,加入0.05%胰酶-EDTA1-1.5ml,顯微鏡下觀察細(xì)胞變圓,輕輕拍打培養(yǎng)瓶直到細(xì)胞脫落,加入終止液終止。
6.1000rpm,5min離心,重懸細(xì)胞。
7.換新的細(xì)胞培養(yǎng)瓶,37℃,5%CO2培養(yǎng)。