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2025年01月14日 09:08通派(上海)生物科技有限公司點擊量:44
細胞:MDA-MB-468細胞
中文名稱:人乳腺腺癌細胞
生長特性:貼壁細胞
培養基:L15+10%FBS(GIBCO胎牛血清)
凍存條件:50%基礎培養基、40% FBS、10% DMSO
細胞常規培養傳代流程( 請嚴格遵照無菌操作)
1. 吸出原培養瓶中的培養基,PBS 緩沖液潤洗細胞兩次,加 2-3 ml 0.25% 胰_酶進行消化細胞(注意把握消化時間,通常控制在 1-2min)
2. 鏡下觀察消化情況,在細胞邊緣縮小,貼壁松動時(不建議消化到細胞漂浮)去掉胰_酶,加 6~8ml 培養基,輕輕吹打細胞層,盡量把細胞層吹落,吹散。
3. 取部分細胞懸液轉移到新的培養皿/瓶中,添加適當的培養基,把細胞懸液打勻,于培養箱中培養。
4. 注意培養基 PH 值變化情況,定期換液(每周 2-3 次),待細胞密度達到 80%以后重復 1 項操作或凍存。
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研究使用了膜支撐的芯片平臺。通過固定模式組裝金屬納米結構,并置入二氧化硅基質中,從而形成脂質層,而膜芯片由這種脂質層構建而成。
這種金屬結構允許胞膜蛋白以一定間距排列在膜上,從而可以在類似芯片平臺的膜上實時觀察某個蛋白。在此次研究過程中,這一獲得支撐的膜使得研究人員可以捕捉每個SOS分子,從而觀察其激活的膜相關Ras蛋白的活動,從分子層面對膜環境的Ras活性進行研究。
該研究證實SOS蛋白(Son of Sevenless)激活 Ras信號的機制。活細胞中Ras的激活涉及一些SOS分子,從而使得每個分子的多樣化行為得到平均(average)。這一突變被認為是一種隨機的“噪點”,研究人員多數認為這是細胞必須克服的一個錯誤。
此次研究顯示,該蛋白隨著活性傳輸信息而在不同狀態之間轉換動態,這意味著研究人員發現了蛋白信號反應的動態耦合完_全基于動力學,而不是信號被平均(average)的結果。
該研究發現,SOS根據不同活性狀態,基于獨_特的隨機波動動力學來實現其調控作用,而這一現象在集成平均化(enseMBLe averages)的過程中是無法體現的。這一長期波動解釋了變構SOS調控和Ras激活的機制。
揭示Ras蛋白信號傳導機制中的隨機動力學變化有利于找到治療Ras導致的癌癥和其他細胞紊亂疾病的新型高效療法。實際上,研究人員認為這一機制的揭示對于很多其他胞內信號蛋白的機制的研究也具有啟發作用。
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