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上海撫生實業有限公司
神經元特異性烯醇化酶抗體經過*實踐已經發展的相當成熟,在免疫學診斷中的應用也相當廣泛。
神經元特異性烯醇化酶抗體動物體內單抗的方法迄今為止,通常情況下均采用動物體內單抗的方法,鑒于絕大多數動物用雜交瘤均由BALB/c小鼠的骨髓瘤細胞與同品系的脾細胞融合而得,因此使用的動物當然*BALB/c小鼠。本方法即將雜交瘤細胞接種于小鼠腹腔內,在小鼠腹腔內生長雜交瘤,并產生腹水,因而可得到大量的腹水單抗且抗體濃度很高。可見該法操作簡便、經濟,不過,腹水中常混有小鼠的各種雜蛋白(包括Ig),因此在很多情況下要提純后才能使用,而且還有污染動物病毒的危險,故而用SPF級小鼠。 神經元特異性烯醇化酶抗體A、材料:a. 成年BALB/c小鼠。b. 降植烷(Pristane)或液體石蠟。c. 處于對數生*的雜交瘤細胞。
B、方法:a. 腹腔接種降植烷或液體石蠟,每只小鼠0.3-0.5ml。b. 7-10天后腹腔接種用PBS或無血清培養基稀釋的雜交瘤細胞,每只小鼠5×105/0.2ml。c. 間隔5天后,每天觀察小鼠腹水產生情況,如腹部明顯膨大,以手觸摸時,皮膚有緊張感,即可用16號針頭采集腹水,一般可連續采2-3次,通常每只小鼠可采5-10ml腹水;d. 將腹水離心(2000r/min 5分鐘),除去細胞成分和其他的沉淀物,收集上清,測定抗體效價,分裝,-70℃凍存備用,或凍干保存。
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Human Atrial Natriuretic Peptide,ANP 人心鈉肽(ANP)
Human dopamine D2 receptor,D2R 人多巴胺D2受體(D2R)
Human endomorphin-2,EM-2 人內*肽-2(EM-2)
Human α-Endomorphin,α-EP 人α-內*肽(α-EP)
Human Inhibin,INH 人抑制素(INH)
Human neuronal apoptosis inhibitory protein,NAIP 人神經元凋亡抑制蛋白(NAIP)
Human Orexin B,OX-B 人食欲素/阿立新B(OX-B)
Human delta sleep-inducing peptide,DSIP 人促睡眠肽(DSIP)
Human 6-hydroxydopamine,6-OHDA 人6-羥多巴胺(6-OHDA)
Human atrial natriuretic factor,ANF 人心納素(ANF)
Human myelin protein 2,p2 人神經髓鞘蛋白(p2)
Human arginine vasopressin,AVP 人*加壓素(AVP)
Human pituitary adenylate cyclase activating polypeptide,PACAP 人垂體腺苷酸環化酶激活肽(PACAP)
Human microtubule-associated protein 2,MAP-2 人微管相關蛋白2(MAP-2)
Human neurofilament protein,NF 人神經絲蛋白(NF)
體外培養單抗的方法總體上講,雜交瘤細胞系并不是嚴格的貼壁依賴細胞(anchorage dependent cell,ADC),因此既可以進行單層細胞培養,又可以進行懸浮培養。雜交瘤細胞的單層細胞培養法是各個實驗室zui常用的手段,即將雜交瘤細胞加入培養瓶中,以含10-15%小牛血清的培養基培養,細胞濃度以1×106-2×106/ml為佳,然后收集培養上清,其中單抗含量約10-50ug/ml。顯然,這種方法制備的單抗量極為有限,無疑是不適用于單抗的大規模。要想在體外大量制備單抗,就必須進行雜交瘤細胞的大量(高密度)培養。單位體積內細胞數量越多,細胞存活時間越長,單抗的濃度就越高,產量就越大。
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