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上海撫生實業有限公司
成骨特異性轉錄因子抗體經過*實踐已經發展的相當成熟,在免疫學診斷中的應用也相當廣泛。
成骨特異性轉錄因子抗體動物體內單抗的方法迄今為止,通常情況下均采用動物體內單抗的方法,鑒于絕大多數動物用雜交瘤均由BALB/c小鼠的骨髓瘤細胞與同品系的脾細胞融合而得,因此使用的動物當然*BALB/c小鼠。本方法即將雜交瘤細胞接種于小鼠腹腔內,在小鼠腹腔內生長雜交瘤,并產生腹水,因而可得到大量的腹水單抗且抗體濃度很高。可見該法操作簡便、經濟,不過,腹水中常混有小鼠的各種雜蛋白(包括Ig),因此在很多情況下要提純后才能使用,而且還有污染動物病毒的危險,故而用SPF級小鼠。成骨特異性轉錄因子抗體A、材料:a. 成年BALB/c小鼠。b. 降植烷(Pristane)或液體石蠟。c. 處于對數生*的雜交瘤細胞。
B、方法:a. 腹腔接種降植烷或液體石蠟,每只小鼠0.3-0.5ml。b. 7-10天后腹腔接種用PBS或無血清培養基稀釋的雜交瘤細胞,每只小鼠5×105/0.2ml。c. 間隔5天后,每天觀察小鼠腹水產生情況,如腹部明顯膨大,以手觸摸時,皮膚有緊張感,即可用16號針頭采集腹水,一般可連續采2-3次,通常每只小鼠可采5-10ml腹水;d. 將腹水離心(2000r/min 5分鐘),除去細胞成分和其他的沉淀物,收集上清,測定抗體效價,分裝,-70℃凍存備用,或凍干保存。(2) 體外培養單抗的方法總體上講,雜交瘤細胞系并不是嚴格的貼壁依賴細胞(anchorage dependent cell,ADC),因此既可以進行單層細胞培養,又可以進行懸浮培養。
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Mouse Aquaporin 4,AQP-4 小鼠水通道蛋白4(AQP-4)
Mouse Aquaporin 3,AQP-3 小鼠水通道蛋白3(AQP-3)
Mouse Aquaporin 1,AQP-1 小鼠水通道蛋白1(AQP-1)
Mouse Aquaporin 0,AQP-0 小鼠水通道蛋白0(AQP-0)
Mouse Aquaporin 2,AQP-2 小鼠水通道蛋白2(AQP-2)
Mouse Thyroglobulin,TG 小鼠甲狀腺球蛋白(TG)
Mouse Inhibin,INH-A 小鼠抑制素A(INH-A)
Mouse Chorionic Gonadotrophin β,β-CG 小鼠絨毛膜*β(β-CG)
Mouse sex hormone-binding globulin,SHBG 小鼠性激素結合球蛋白(SHBG)
Mouse Dehydroepiandrosterone S7,DHEA-S7 小鼠脫氫表雄酮S7(DHEA-S7)
Mouse Dehydroepiandrosterone,DHEA 小鼠脫氫表雄酮(DHEA)
Mouse High mobility group protein B1,HMGB-1 小鼠高遷移率族蛋白B1(HMGB-1)
Mouse Endothelial lipase,EL 小鼠內皮脂肪酶(EL)
雜交瘤細胞的單層細胞培養法是各個實驗室zui常用的手段,即將雜交瘤細胞加入培養瓶中,以含10-15%小牛血清的培養基培養,細胞濃度以1×106-2×106/ml為佳,然后收集培養上清,其中單抗含量約10-50ug/ml。顯然,這種方法制備的單抗量極為有限,無疑是不適用于單抗的大規模。要想在體外大量制備單抗,就必須進行雜交瘤細胞的大量(高密度)培養。單位體積內細胞數量越多,細胞存活時間越長,單抗的濃度就越高,產量就越大。
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