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更新時間:2016-01-10 23:43:36瀏覽次數(shù):512次
聯(lián)系我時,請告知來自 智慧城市網(wǎng)脂肪細胞增強結(jié)合蛋白1經(jīng)過*實踐已經(jīng)發(fā)展的相當成熟,在免疫學診斷中的應用也相當廣泛。
脂肪細胞增強結(jié)合蛋白1動物體內(nèi)單抗的方法迄今為止,通常情況下均采用動物體內(nèi)單抗的方法,鑒于絕大多數(shù)動物用雜交瘤均由BALB/c小鼠的骨髓瘤細胞與同品系的脾細胞融合而得,因此使用的動物當然*BALB/c小鼠。本方法即將雜交瘤細胞接種于小鼠腹腔內(nèi),在小鼠腹腔內(nèi)生長雜交瘤,并產(chǎn)生腹水,因而可得到大量的腹水單抗且抗體濃度很高??梢娫摲ú僮骱啽?、經(jīng)濟,不過,腹水中?;煊行∈蟮母鞣N雜蛋白(包括Ig),因此在很多情況下要提純后才能使用,而且還有污染動物病毒的危險,故而用SPF級小鼠。 脂肪細胞增強結(jié)合蛋白1A、材料:a. 成年BALB/c小鼠。b. 降植烷(Pristane)或液體石蠟。c. 處于對數(shù)生*的雜交瘤細胞。
B、方法:a. 腹腔接種降植烷或液體石蠟,每只小鼠0.3-0.5ml。b. 7-10天后腹腔接種用PBS或無血清培養(yǎng)基稀釋的雜交瘤細胞,每只小鼠5×105/0.2ml。c. 間隔5天后,每天觀察小鼠腹水產(chǎn)生情況,如腹部明顯膨大,以手觸摸時,皮膚有緊張感,即可用16號針頭采集腹水,一般可連續(xù)采2-3次,通常每只小鼠可采5-10ml腹水;d. 將腹水離心(2000r/min 5分鐘),除去細胞成分和其他的沉淀物,收集上清,測定抗體效價,分裝,-70℃凍存?zhèn)溆?,或凍干保存?span style="font-size: small">
(2) 體外培養(yǎng)單抗的方法總體上講,雜交瘤細胞系并不是嚴格的貼壁依賴細胞(anchorage dependent cell,ADC),因此既可以進行單層細胞培養(yǎng),又可以進行懸浮培養(yǎng)。
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Human 17-ketosteroids,17-KS 人17-酮類固醇(17-KS)
Human 17-Hydroxycorticosteroids,17-OHCS 人17羥皮質(zhì)類固醇(17-OHCS)
Human Cathepsin K,cath-K 人組織蛋白酶K(cath-K)
Human bone morphogenetic proteins,BMPs 人骨形成蛋白(BMPs)
Human Retinol binding protein 4,RBP-4 人*結(jié)合蛋白4(RBP-4)
Human proteolipid protein,PLP 人蛋白脂質(zhì)蛋白抗體(PLP)
Human vanillylmandelic acid,VMA 人垂草扁桃酸(VMA)
Human glucokinase regulatory protein,GKRP 人葡萄糖激酶調(diào)節(jié)蛋白(GKRP)
Human hemagglutinin,HA 人血凝素(HA)
Human adipose differentiation-related protein,ADRP 人脂肪分化相關蛋白(ADRP)
Human Caldesmon,CALD 人鈣調(diào)結(jié)合蛋白(CALD)
Human calcineurin,CaN 人鈣調(diào)磷酸酶(CaN)
Human CTX-2 人骨退化特異標志物(CTX-2)
Human Calretinin,CR 人鈣結(jié)合蛋白(CR)
雜交瘤細胞的單層細胞培養(yǎng)法是各個實驗室zui常用的手段,即將雜交瘤細胞加入培養(yǎng)瓶中,以含10-15%小牛血清的培養(yǎng)基培養(yǎng),細胞濃度以1×106-2×106/ml為佳,然后收集培養(yǎng)上清,其中單抗含量約10-50ug/ml。顯然,這種方法制備的單抗量極為有限,無疑是不適用于單抗的大規(guī)模。要想在體外大量制備單抗,就必須進行雜交瘤細胞的大量(高密度)培養(yǎng)。單位體積內(nèi)細胞數(shù)量越多,細胞存活時間越長,單抗的濃度就越高,產(chǎn)量就越大。
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