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更新時(shí)間:2016-01-02 18:06:25瀏覽次數(shù):530次
聯(lián)系我時(shí),請告知來自 智慧城市網(wǎng)抗三聚氰胺抗體經(jīng)過*實(shí)踐已經(jīng)發(fā)展的相當(dāng)成熟,在免疫學(xué)診斷中的應(yīng)用也相當(dāng)廣泛。
抗三聚氰胺抗體anti-Melamine動(dòng)物體內(nèi)單抗的方法迄今為止,通常情況下均采用動(dòng)物體內(nèi)單抗的方法,鑒于絕大多數(shù)動(dòng)物用雜交瘤均由BALB/c小鼠的骨髓瘤細(xì)胞與同品系的脾細(xì)胞融合而得,因此使用的動(dòng)物當(dāng)然*BALB/c小鼠。本方法即將雜交瘤細(xì)胞接種于小鼠腹腔內(nèi),在小鼠腹腔內(nèi)生長雜交瘤,并產(chǎn)生腹水,因而可得到大量的腹水單抗且抗體濃度很高??梢娫摲ú僮骱啽?、經(jīng)濟(jì),不過,腹水中?;煊行∈蟮母鞣N雜蛋白(包括Ig),因此在很多情況下要提純后才能使用,而且還有污染動(dòng)物病毒的危險(xiǎn),故而用SPF級小鼠。
抗三聚氰胺抗體anti-MelamineA、材料:a. 成年BALB/c小鼠。b. 降植烷(Pristane)或液體石蠟。c. 處于對數(shù)生*的雜交瘤細(xì)胞。
B、方法:a. 腹腔接種降植烷或液體石蠟,每只小鼠0.3-0.5ml。b. 7-10天后腹腔接種用PBS或無血清培養(yǎng)基稀釋的雜交瘤細(xì)胞,每只小鼠5×105/0.2ml。c. 間隔5天后,每天觀察小鼠腹水產(chǎn)生情況,如腹部明顯膨大,以手觸摸時(shí),皮膚有緊張感,即可用16號針頭采集腹水,一般可連續(xù)采2-3次,通常每只小鼠可采5-10ml腹水;d. 將腹水離心(2000r/min 5分鐘),除去細(xì)胞成分和其他的沉淀物,收集上清,測定抗體效價(jià),分裝,-70℃凍存?zhèn)溆?,或凍干保存?span style="color: #ff0000">anti-Melamine
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六出花花葉病毒 Alstroemeria Mosaic Virus
美洲李子線狀病毒 American Plumline Pattern Virus
安第斯馬鈴薯隱性病毒 Andean Potato Latent Virus
安第斯馬鈴薯斑駁病毒 Andean Potato Mottle Virus
蘋果褪綠葉斑病毒 Apple Chlorotic Leafspot Virus
蘋果花葉病毒 Apple Mosaic Virus
蘋果莖溝病毒 Apple Stem Grooving Virus
蘋果莖痘病毒 Apple Stem Pitting Virus
南芥菜花葉病毒 Arabis Mosaic Virus
秘魯葫蘿卜B病毒OCA株 Arracacha Virus B-OCA Strain
香蕉苞片花葉病毒 Banana Bract Mosaic Virus
香蕉束頂病毒 Banana Bunchy Top Virus
香蕉條紋病毒 Banana Streak Virus
(2) 體外培養(yǎng)單抗的方法總體上講,雜交瘤細(xì)胞系并不是嚴(yán)格的貼壁依賴細(xì)胞(anchorage dependent cell,ADC),因此既可以進(jìn)行單層細(xì)胞培養(yǎng),又可以進(jìn)行懸浮培養(yǎng)。雜交瘤細(xì)胞的單層細(xì)胞培養(yǎng)法是各個(gè)實(shí)驗(yàn)室zui常用的手段,即將雜交瘤細(xì)胞加入培養(yǎng)瓶中,以含10-15%小牛血清的培養(yǎng)基培養(yǎng),細(xì)胞濃度以1×106-2×106/ml為佳,然后收集培養(yǎng)上清,其中單抗含量約10-50ug/ml。顯然,這種方法制備的單抗量極為有限,無疑是不適用于單抗的大規(guī)模。要想在體外大量制備單抗,就必須進(jìn)行雜交瘤細(xì)胞的大量(高密度)培養(yǎng)。單位體積內(nèi)細(xì)胞數(shù)量越多,細(xì)胞存活時(shí)間越長,單抗的濃度就越高,產(chǎn)量就越大。anti-Melamine
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